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faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 反转录PCR时基因特异引物与oligo(dT)有何差别

近期在通过qRT-PCR测定RNAi植株中目的基因的表达情况,始终无法获得较好的溶解曲线,得不到Ct值,反转录用的是oligo(dT),cDNA质量检测过,没有问题,烦请各位提供解决方案,用基因特异引物效果会如何?急求,拜谢。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-30 10:10:23
faile18: 金币+2 2013-08-06 22:13:04
可以试试用3'特异引物。用oligodT当然是通用的,但所有mRNA竞争引物,当目的基因的转录水平低,有时反转录后cDNA的模板量不够。
4楼2013-07-29 23:42:01
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
oligo(dt)反转录肯定比较好啊 ,它是跟RNA的3‘da结合的 。
2楼2013-07-29 15:18:44
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faile18

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-07-29 15:18:44
oligo(dt)反转录肯定比较好啊 ,它是跟RNA的3‘da结合的 。

谢谢,这个了解到了。其他疑问有何高见?
3楼2013-07-29 23:29:42
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
faile18: 金币+2 2013-08-06 22:13:14
是不是因为楼主的RNAi很成功所以根本做不出目标基因的PCR了.....
5楼2013-07-30 00:34:28
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