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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

[求助] cDNA反转录引物的区别

本人新手,在做PCR时,首先反转录这步,用了特异性引物和Oligo18,在PCR完成后,发现用特异性引物的条带 要么没有 ,要么有杂带。而Oligo18反转录的就没有杂带,且容易出阳性,比特异性引物P的容易出阳性。特异性引物为什么没有Oligo18好用呢?它的特异性不是比较强吗?
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
q317476148: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-21 17:29:36
理论上特异性引物的特异性强,跟olig dt应该差不多,但是由于引物设计方面导致的引物差异,实际效果要劣于oligdt
2楼2013-01-21 12:36:58
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

引用回帖:
2楼: Originally posted by cdl007 at 2013-01-21 12:36:58
理论上特异性引物的特异性强,跟olig dt应该差不多,但是由于引物设计方面导致的引物差异,实际效果要劣于oligdt

那你做的话一般用哪种反转录引物,效果怎么样?
3楼2013-01-21 17:29:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
真核生物用oligodT,原核生物用随机引物。如果mRNA丰度非常低,也用特异3'引物做,效果都不错。
4楼2013-01-22 03:00:17
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-22 03:00:17
真核生物用oligodT,原核生物用随机引物。如果mRNA丰度非常低,也用特异3'引物做,效果都不错。

那我做的是真核生物。为什么特异性引物反转的效果比oligodT差好多呢
5楼2013-01-22 11:28:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by q317476148 at 2013-01-22 11:28:50
那我做的是真核生物。为什么特异性引物反转的效果比oligodT差好多呢...

是不是你的3'引物的特异性不好吗?
6楼2013-01-22 11:37:31
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by q317476148 at 2013-01-21 17:29:00
那你做的话一般用哪种反转录引物,效果怎么样?...

都有用过,
反正是反转录,一般都能拉出来
7楼2013-01-22 14:24:13
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-22 11:37:31
是不是你的3'引物的特异性不好吗?...

blast验过还可以啊,生工帮我设计 的
8楼2013-01-22 15:55:30
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