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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

[求助] cDNA反转录引物的区别

本人新手，在做PCR时，首先反转录这步，用了特异性引物和Oligo18,在PCR完成后，发现用特异性引物的条带 要么没有 ，要么有杂带。而Oligo18反转录的就没有杂带，且容易出阳性，比特异性引物P的容易出阳性。特异性引物为什么没有Oligo18好用呢？它的特异性不是比较强吗？
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1楼2013-01-21 12:32:26
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
q317476148: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-21 17:29:36
理论上特异性引物的特异性强，跟olig dt应该差不多，但是由于引物设计方面导致的引物差异，实际效果要劣于oligdt
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2楼2013-01-21 12:36:58
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人
引用回帖:
2楼: Originally posted by cdl007 at 2013-01-21 12:36:58
理论上特异性引物的特异性强，跟olig dt应该差不多，但是由于引物设计方面导致的引物差异，实际效果要劣于oligdt

那你做的话一般用哪种反转录引物，效果怎么样？
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3楼2013-01-21 17:29:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
真核生物用oligodT，原核生物用随机引物。如果mRNA丰度非常低，也用特异3'引物做，效果都不错。
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4楼2013-01-22 03:00:17
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-22 03:00:17
真核生物用oligodT，原核生物用随机引物。如果mRNA丰度非常低，也用特异3'引物做，效果都不错。

那我做的是真核生物。为什么特异性引物反转的效果比oligodT差好多呢
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5楼2013-01-22 11:28:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by q317476148 at 2013-01-22 11:28:50
那我做的是真核生物。为什么特异性引物反转的效果比oligodT差好多呢...

是不是你的3'引物的特异性不好吗？
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6楼2013-01-22 11:37:31
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by q317476148 at 2013-01-21 17:29:00
那你做的话一般用哪种反转录引物，效果怎么样？...

都有用过，
反正是反转录，一般都能拉出来
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7楼2013-01-22 14:24:13
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-22 11:37:31
是不是你的3'引物的特异性不好吗？...

blast验过还可以啊，生工帮我设计 的
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8楼2013-01-22 15:55:30
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