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cDNA反转录引物的区别
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q317476148
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cDNA反转录引物的区别
本人新手,在做PCR时,首先反转录这步,用了特异性引物和Oligo18,在PCR完成后,发现用特异性引物的条带 要么没有 ,要么有杂带。而Oligo18反转录的就没有杂带,且容易出阳性,比特异性引物P的容易出阳性。特异性引物为什么没有Oligo18好用呢?它的特异性不是比较强吗?
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1楼
2013-01-21 12:32:26
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2楼
:
Originally posted by
cdl007
at 2013-01-21 12:36:58
理论上特异性引物的特异性强,跟olig dt应该差不多,但是由于引物设计方面导致的引物差异,实际效果要劣于oligdt
那你做的话一般用哪种反转录引物,效果怎么样?
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3楼
2013-01-21 17:29:00
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4楼
:
Originally posted by
cicelyzh
at 2013-01-22 03:00:17
真核生物用oligodT,原核生物用随机引物。如果mRNA丰度非常低,也用特异3'引物做,效果都不错。
那我做的是真核生物。为什么特异性引物反转的效果比oligodT差好多呢
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5楼
2013-01-22 11:28:50
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6楼
:
Originally posted by
cicelyzh
at 2013-01-22 11:37:31
是不是你的3'引物的特异性不好吗?...
blast验过还可以啊,生工帮我设计 的
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8楼
2013-01-22 15:55:30
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