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thinkerboy

铁虫 (小有名气)

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[求助] 相对荧光定量cDNA的问题

求问坛子里的各位大神，我做相对荧光定量，首先提组织RNA，然后反转录成cDNA，以cDNA做模板做荧光定量，我主要做不同组织里的目的基因的相对表达量，请问我在提各个组织RNA，反转录后，要不要将各个组织反转录的cDNA测一下浓度，然后将各个组织的cDNA浓度稀释调整到相同的浓度，作为模板做荧光定量。也就是说我需要调整一下RNA浓度再反转录，或者是统一一下各个组织的cDNA浓度再作模板吗。

[ Last edited by thinkerboy on 2013-7-26 at 21:10 ]

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1楼 2013-07-26 21:00:26

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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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管辖: 分子生物

【答案】应助回帖

反转录之前的RNA需要测一下浓度，然后取相同量的RNA进行逆转录，然后取相同量的“RNA”做Realtime，取相同量的RNA做，可以辅助判断实验的成败，理论上同量的RNA即使是不同样品，内参的Ct值是基本一样的，如果你的内参Ct值相差很大，说明你实验控制的不好

学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com

8楼2013-09-27 17:17:44

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