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求高手指点PCR
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lijianfu12
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求高手指点PCR
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今天做了个PCR,跑出的条带大小只有200bp,但我要的是2000bp作用,请大神分析下,谢谢!
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2013-07-21 15:57:20
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额,只上一张图别人是没法给你分析的。2000bp,你的目标条带好大啊。
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2013-07-21 16:05:13
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liyongliangx
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把具体的protocol 发上来吧,详细点
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2013-07-21 19:29:01
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2013-07-22 19:03:35
试没试过不同退火温度?拿什么酶P的?延伸时间是否够?
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2013-07-21 21:28:33
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2013-07-22 19:04:00
存在因素很多,很明显你没得到目的带,但你得到一条单一的非特异带,所以很可能是引物或模板的问题。
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5楼
2013-07-22 05:52:34
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:
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liyongliangx
at 2013-07-21 19:29:01
把具体的protocol 发上来吧,详细点
pcr过程是:
94℃ 5min
94℃ 1mim
55℃ 1min
72℃ 1min
72℃ 7min
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好好搞学术
6楼
2013-07-22 10:46:48
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2013-07-22 19:04:09
没有目标条带,检查一下你的pprotocol,把你的引物和你的模板比对一下,看一下目标条带的位置和大小。
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7楼
2013-07-22 10:48:14
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4楼
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cicelyzh
at 2013-07-21 21:28:33
试没试过不同退火温度?拿什么酶P的?延伸时间是否够?
没有试过不同退火温度,用的是TAq酶,延伸时间1min,30个循环
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8楼
2013-07-22 10:48:28
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Sthunder
at 2013-07-22 05:52:34
存在因素很多,很明显你没得到目的带,但你得到一条单一的非特异带,所以很可能是引物或模板的问题。
谢谢。。。那我是得重新设计引物吗?
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9楼
2013-07-22 10:49:09
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Sthunder
at 2013-07-22 05:52:34
存在因素很多,很明显你没得到目的带,但你得到一条单一的非特异带,所以很可能是引物或模板的问题。
我设计6对引物p的,只有两对引物p出200bp,其他没条带。。。
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10楼
2013-07-22 10:50:37
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