应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求高手指点PCR
343/4返回列表上一页1234下一页
查看: 1826  |  回复: 33
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lcy1971

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by lijianfu12 at 2013-07-22 10:46:48
pcr过程是：
94℃ 5min
94℃  1mim
55℃  1min
72℃  1min
72℃  7min
30个循环...

2k长度，一般延伸2分钟较好，1分钟可能不够。变性和退火30秒应该就可以了。
赞一下 回复此楼
21楼2013-07-22 17:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyc_charles

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by lijianfu12 at 2013-07-22 11:14:25
不好意思，我菜鸟一个！
目的是做植物某个酶的基因克隆，大概念2000bp，
pcr体系：50µl
10 Ex Taq Buffer  5µl
引物各2µl
模版2µl
taq酶2µl
mgcl2  3& ...

你的PCR体系里怎么没有dNTPmix呢，是不是忘加了！！
赞一下 回复此楼
不但要做一个优秀的人，更要做一个无可取代的人…
22楼2013-07-22 18:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyongliangx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lijianfu12 at 2013-07-22 10:46:48
pcr过程是：
94℃ 5min
94℃  1mim
55℃  1min
72℃  1min
72℃  7min
30个循环...

模板和引物 浓度呢？
赞一下 回复此楼
23楼2013-07-22 19:24:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xz2001199802

金虫 (正式写手)
其他的原因先不说，延伸的时间就不够，2000bp，TAQ跑不出来的
赞一下 回复此楼
越学越无知
24楼2013-07-22 19:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dreamsnow2004

银虫 (初入文坛)
没有目的条带，那个200左右的是引物二聚体吧
赞一下 回复此楼
25楼2013-07-22 20:13:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuer9809

至尊木虫 (著名写手)
引物有没有问题，别设计出来本来就P不到东西。 模板质量如何？解决这2个问题。PCR其实很好做。
赞一下 回复此楼
26楼2013-07-22 22:05:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lijianfu12 at 2013-07-22 10:50:37
我设计6对引物p的，只有两对引物p出200bp，其他没条带。。。...

你说的6对引物是针对你的目的基因？那你目的基因大小是多少？你P出来的条带和对应引物预计大小是否一致？
赞一下 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
27楼2013-07-23 00:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-23 00:21:50
你说的6对引物是针对你的目的基因？那你目的基因大小是多少？你P出来的条带和对应引物预计大小是否一致？...

目的基因是2000左右的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
好好搞学术
28楼2013-07-23 08:18:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by yuer9809 at 2013-07-22 22:05:02
引物有没有问题，别设计出来本来就P不到东西。 模板质量如何？解决这2个问题。PCR其实很好做。

引物放NCBI能够出来！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
好好搞学术
29楼2013-07-23 08:19:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-07-22 19:24:38
模板和引物 浓度呢？...

模板和引物个2μL

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
好好搞学术
30楼2013-07-23 08:20:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lijianfu12 的主题更新
343/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:02 by l0VvVHGBGRLv
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:30 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 06:57 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 06:11 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 05:40 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 13/650 2026-08-30 05:38 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭