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lijianfu12

银虫 (正式写手)

[求助] 求高手指点PCR已有10人参与

今天做了个PCR,跑出的条带大小只有200bp,但我要的是2000bp作用,请大神分析下,谢谢!
求高手指点PCR
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好好搞学术
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by hyc_charles at 2013-07-22 11:03:20
你要说详细点,你的目的是什么,用的什么体系,多少浓度的胶

不好意思,我菜鸟一个!
目的是做植物某个酶的基因克隆,大概念2000bp,
pcr体系:50µl
10 Ex Taq Buffer  5µl
引物各2µl
模版2µl
taq酶2µl
mgcl2  3µl
ddH2O 30µl
pcr过程:
94℃ 5min
94 ℃   1min
55 ℃    1min
72 ℃     1min
72 ℃      7min
30个循环
1%的琼脂糖电泳
好好搞学术
14楼2013-07-22 11:14:25
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yilunanxia

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
额,只上一张图别人是没法给你分析的。2000bp,你的目标条带好大啊。
2楼2013-07-21 16:05:13
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
把具体的protocol 发上来吧,详细点
3楼2013-07-21 19:29:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-22 19:03:35
试没试过不同退火温度?拿什么酶P的?延伸时间是否够?
4楼2013-07-21 21:28:33
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