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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求高手指点PCR
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

[求助] 求高手指点PCR 已有10人参与

今天做了个PCR，跑出的条带大小只有200bp，但我要的是2000bp作用，请大神分析下，谢谢！
求高手指点PCR
IMG_2476.JPG
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好好搞学术
1楼 2013-07-21 15:57:20
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yilunanxia

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
额，只上一张图别人是没法给你分析的。2000bp，你的目标条带好大啊。
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2楼2013-07-21 16:05:13
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把具体的protocol 发上来吧，详细点
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3楼2013-07-21 19:29:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-22 19:03:35
试没试过不同退火温度？拿什么酶P的？延伸时间是否够？
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4楼2013-07-21 21:28:33
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Sthunder

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-22 19:04:00
存在因素很多，很明显你没得到目的带，但你得到一条单一的非特异带，所以很可能是引物或模板的问题。
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互助互励，共奋共进！！
5楼2013-07-22 05:52:34
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-07-21 19:29:01
把具体的protocol 发上来吧，详细点

pcr过程是：
94℃ 5min
94℃  1mim
55℃  1min
72℃  1min
72℃  7min
30个循环
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好好搞学术
6楼2013-07-22 10:46:48
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zhuqiyu

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-07-22 19:04:09
没有目标条带，检查一下你的pprotocol，把你的引物和你的模板比对一下，看一下目标条带的位置和大小。
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7楼2013-07-22 10:48:14
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-21 21:28:33
试没试过不同退火温度？拿什么酶P的？延伸时间是否够？

没有试过不同退火温度，用的是TAq酶，延伸时间1min，30个循环
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好好搞学术
8楼2013-07-22 10:48:28
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-22 05:52:34
存在因素很多，很明显你没得到目的带，但你得到一条单一的非特异带，所以很可能是引物或模板的问题。

谢谢。。。那我是得重新设计引物吗？
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好好搞学术
9楼2013-07-22 10:49:09
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-22 05:52:34
存在因素很多，很明显你没得到目的带，但你得到一条单一的非特异带，所以很可能是引物或模板的问题。

我设计6对引物p的，只有两对引物p出200bp，其他没条带。。。
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好好搞学术
10楼2013-07-22 10:50:37
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