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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒丢失了一段怎么办
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蜂鸟404

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 质粒丢失了一段怎么办

最近要用一个质粒，是一种特殊质粒，市场上买不到，可是测序发现该质粒缺少了三四十bp的片段，而确实的正好是复制子部分，现在不能用了，求助各位大侠怎么把缺失的补上，这个质粒很重要，不胜感激
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1楼 2013-06-25 09:46:54
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-25 10:31:28
第一、确定是质粒缺少了一段
第二、确定质粒真的没用
第三、送公司构建质粒
实验顺利~
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总有一天我要修改用户名。
2楼2013-06-25 10:07:21
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:31:47
overlap pcr 设计长引物把确实的补上。。再连接测序
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3楼2013-06-25 10:44:07
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:31:54
可以重新构建下质粒试试，在缺失的地方加两个酶切位点。
再测序，试试，祝好运
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4楼2013-06-25 10:54:49
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:32:02
我很好奇的是缺失了复制子的质粒是怎么在细菌里面增值之后然后被提取出来的……
其实这个也简单，你缺了34个bp的话，合成一对引物，然后退火搭出来缺的那一段就行了嘛~
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5楼2013-06-25 16:33:01
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蜂鸟404

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weigh1111 at 2013-06-25 16:33:01
我很好奇的是缺失了复制子的质粒是怎么在细菌里面增值之后然后被提取出来的……
其实这个也简单，你缺了34个bp的话，合成一对引物，然后退火搭出来缺的那一段就行了嘛~

这是一个穿梭质粒，在大肠里的复制起始还在，你这个我没想过，不知道引物太长容不容易成功
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6楼2013-06-26 09:36:00
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蜂鸟404 at 2013-06-26 09:36:00
这是一个穿梭质粒，在大肠里的复制起始还在，你这个我没想过，不知道引物太长容不容易成功...

59bp以下引物合成都是一样的价格哈~
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7楼2013-06-26 12:44:05
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