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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

[求助] 我做了3周的载体构建了就是构建不上,求助啊

我做了3周的载体构建了就是构建不上,转化后会有菌落也能摇起来,提完质粒用双酶切鉴定跑胶后什么条带都没有了,现在郁闷至极,不知道哪里出问题了,各位大侠求助啊!!!
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

信息太少,构建过程都没有,谁知道什么问题。
2楼2013-06-23 12:16:15
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oranzxc

金虫 (初入文坛)

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1949stone: 金币+1, 运气很重要啊 2013-06-24 14:06:34
我师兄说载体构建首先要保证原始材料是正确的(亲自鉴定),每一步操作以后都要验证是否达到了设计的效果,最后再加上一点运气吧
3楼2013-06-23 13:03:53
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2013-06-24 14:06:17
1949stone: 金币+1, 赞一个 2013-06-24 14:06:43
4楼2013-06-23 14:49:17
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
我晴天一片(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 21:42:53
转化后能摇起来,说明至少是空载体。如果你的抗生素没有失效的话。
最好把你的连接体系列出来,以供分析。
把你酶切后的载体用CIAP处理一下,这样就没有那么多自我连接的了。
5楼2013-06-23 15:59:05
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒提取后跑电泳能看到条带吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2013-06-23 19:33:42
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
我晴天一片(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 21:43:03
提完质粒,跑胶看质量,测浓度后按量再酶切,胶回收后测浓度,按量连接,,每一步最好都定量
7楼2013-06-23 19:39:16
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-23 19:33:42
质粒提取后跑电泳能看到条带吗?

有条带,但是是好几条,一般做到这里我就觉得不对了,可是我提出来的到底是什么呢??就是不知道什么原因
8楼2013-06-23 21:33:36
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-06-23 15:59:05
转化后能摇起来,说明至少是空载体。如果你的抗生素没有失效的话。
最好把你的连接体系列出来,以供分析。
把你酶切后的载体用CIAP处理一下,这样就没有那么多自我连接的了。

酶切体系10微,基因载体是按浓度的3:1连的,然后1微的T4连接酶,1微的buffer。20微体系也连了,倍数扩大了2倍。这个酶切后的CIAP处理要怎么处理呢?、
9楼2013-06-23 21:36:37
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-06-23 12:16:15
信息太少,构建过程都没有,谁知道什么问题。

构建构成是通常我们的过程,实验室都是这么做的,但我就是做不出来
10楼2013-06-23 21:37:44
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