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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

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[求助] 我做了3周的载体构建了就是构建不上，求助啊

我做了3周的载体构建了就是构建不上，转化后会有菌落也能摇起来，提完质粒用双酶切鉴定跑胶后什么条带都没有了，现在郁闷至极，不知道哪里出问题了，各位大侠求助啊！！！

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1楼 2013-06-23 11:25:43

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引用回帖:

5楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-06-23 15:59:05
转化后能摇起来，说明至少是空载体。如果你的抗生素没有失效的话。
最好把你的连接体系列出来，以供分析。
把你酶切后的载体用CIAP处理一下，这样就没有那么多自我连接的了。

酶切体系10微，基因载体是按浓度的3:1连的，然后1微的T4连接酶，1微的buffer。20微体系也连了，倍数扩大了2倍。这个酶切后的CIAP处理要怎么处理呢？、