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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)

[求助] 植物表达载体构建求助啊，我打算用pBI121的，出现问题了。

我有个水稻的mRNA,打算就把编码序列（CDs）扩出来，作为目的基因，克隆到pBI121这个植物表达载体上，目的是为了看这个基因能否提高植物的抗旱性。请问我把这段目的片段放在35S和GUS基因之间的话，能表达出来吗？因为我是导到拟南芥里的，得用双子叶植物的启动子。而且GUS用来检测用呢，没打算切掉，不过有人说这样搞会形成融合蛋白，给检测带来麻烦。还有，我问过别人，有人说再搞个中间载体，把启动子+目的基因+终止子都连起来，再导入最终的表达载体上去，感觉这样太复杂，本人新手一枚，想从简单的先学起，拜托各位老重赐教啊~~~急~~~
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1楼 2012-12-02 12:46:34
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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)
求助啊，真么没有人回，囧~~~
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面包会有的，牛奶也会有的
2楼2012-12-04 14:22:56
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
宫保鸡丁YZ: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-05 16:23:08
一般来说融合蛋白不影响gus的检测，不过影响不影响目的蛋白功能就不一定了。我个人倒是觉得，如果不做定位的的话，gus检测不是那么重要。可以把gus切下去（选用sacI位点）。pcr在基因组合转录组里面都能检测出来就认为目的基因正确表达了。
要注意的是如果不融合的话别忘了CDS是要带终止密码子的。
如果融合，别忘了考虑GUS的读码正确，目的基因CDS后面要把终止密码子去掉。
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宫保鸡丁YZ
3楼2012-12-04 22:00:06
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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by titus0805 at 2012-12-04 22:00:06
一般来说融合蛋白不影响gus的检测，不过影响不影响目的蛋白功能就不一定了。我个人倒是觉得，如果不做定位的的话，gus检测不是那么重要。可以把gus切下去（选用sacI位点）。pcr在基因组合转录组里面都能检测出来就认 ...

太感谢了，终于有人回帖了~~~
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面包会有的，牛奶也会有的
4楼2012-12-05 11:08:48
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