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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)

[求助] 植物表达载体构建求助啊,我打算用pBI121的,出现问题了。

我有个水稻的mRNA,打算就把编码序列(CDs)扩出来,作为目的基因,克隆到pBI121这个植物表达载体上,目的是为了看这个基因能否提高植物的抗旱性。请问我把这段目的片段放在35S和GUS基因之间的话,能表达出来吗?因为我是导到拟南芥里的,得用双子叶植物的启动子。而且GUS用来检测用呢,没打算切掉,不过有人说这样搞会形成融合蛋白,给检测带来麻烦。还有,我问过别人,有人说再搞个中间载体,把启动子+目的基因+终止子都连起来,再导入最终的表达载体上去,感觉这样太复杂,本人新手一枚,想从简单的先学起,拜托各位老重赐教啊~~~急~~~
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面包会有的,牛奶也会有的
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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)

求助啊,真么没有人回,囧~~~
面包会有的,牛奶也会有的
2楼2012-12-04 14:22:56
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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宫保鸡丁YZ: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-05 16:23:08
一般来说融合蛋白不影响gus的检测,不过影响不影响目的蛋白功能就不一定了。我个人倒是觉得,如果不做定位的的话,gus检测不是那么重要。可以把gus切下去(选用sacI位点)。pcr在基因组合转录组里面都能检测出来就认为目的基因正确表达了。
要注意的是如果不融合的话别忘了CDS是要带终止密码子的。
如果融合,别忘了考虑GUS的读码正确,目的基因CDS后面要把终止密码子去掉。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-12-04 22:00:06
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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by titus0805 at 2012-12-04 22:00:06
一般来说融合蛋白不影响gus的检测,不过影响不影响目的蛋白功能就不一定了。我个人倒是觉得,如果不做定位的的话,gus检测不是那么重要。可以把gus切下去(选用sacI位点)。pcr在基因组合转录组里面都能检测出来就认 ...

太感谢了,终于有人回帖了~~~
面包会有的,牛奶也会有的
4楼2012-12-05 11:08:48
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