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taigongzaici

新虫 (小有名气)

[求助] 构建植物表达载体pBI121带着GUS有木有影响啊

各位大侠
本人有个问题请教,谢谢!

    我目前在构建植物表达载体pBI121,有人说切掉GUS,换上我的目的基因;还有人说不需要切掉GUS,只需要将我的目的基因去掉终止子,连在GUS之前就可以了,带着GUS,为后续的染色提供方便。还有人说,带着GUS,容易发生蛋白融合现象,对我后续的实验也许会有影响。还有人说,做一个带GUS的,做一个不带GUS的,当个对照,我晕了,在这里请教各位高手,谁能给俺个比较详细权威的说法,谢谢,不胜感激!!
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
taigongzaici(金币+1): 友情参与 2011-11-16 16:23:32
西瓜(金币+2): 欢迎交流啊 2011-11-28 17:50:06
哇哇哇,这么巧额,整好我现在也构建载体也用pBI121,GUS我没有动,后面要做GUS染色嘛。我用的XbaIBamHI 连接的外源。外源最好用双酶切位点,单酶切位点还要考虑正反的。酶切位点的选择一定要慎重!
2楼2011-11-15 19:11:47
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

关于你说GUS存在会对蛋白表达有影响什么的,这个我也不是特别的清楚的。
3楼2011-11-15 19:14:19
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youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


taigongzaici(金币+1): 和没说一样 2011-11-16 16:23:58
西瓜(金币+1): good 2011-11-28 17:50:18
主要看你干什么喽!连GUS的目的是为了定位你目的基因的组织表达与分布情况,如果需要研究这块内容就要连上GUS,如果不需要就切掉吧!
天才就怕不够天才,坏又不够坏,天天都想离开,却不知何处才能换骨脱胎
4楼2011-11-15 20:33:27
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taigongzaici

新虫 (小有名气)

期待高人来解答!!!!
5楼2011-11-16 16:25:14
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taigongzaici

新虫 (小有名气)

为啥木有人给我回答!!!
6楼2011-11-22 13:01:09
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jeffzm

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

taigongzaici(金币+1): 没说到点子上 2011-11-24 12:38:54
看你试验的目的是什么了?如果为了得到转基因植株去掉gus比较好,安全转基因嘛!要是为了进行基因功能检测那得带着gus了,看看它的表达!
7楼2011-11-24 10:13:57
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jeffzm

铁虫 (初入文坛)

你都没说你接下来要做什么啊。。
8楼2011-11-25 10:51:05
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taigongzaici

新虫 (小有名气)

我要搞清楚再做决定
带着GUS,容易发生蛋白融合现象,对我后续的实验也许会有影响。还有人说,做一个带GUS的,做一个不带GUS的,当个对照,
9楼2011-11-28 12:17:44
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宫保鸡丁YZ

银虫 (小有名气)

一同求教,我有个水稻的mRNA,打算就把编码序列(CDs)扩出来,作为目的基因,请问我把这段目的片段放在35S和GUS基因之间的话,能表达出来吗?因为我是导到拟南芥里的,得用双子叶植物的启动子。
面包会有的,牛奶也会有的
10楼2012-12-02 12:30:12
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