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04swlcm

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】同尾酶构建载体问题 已有1人参与

大家好!
       我最近做重组载体的构建,载体3.5kb,目的片段2.5kb,就是将PCR产物和载体同时BglII和BamHI双酶切(问题是设计引物的时候忽略了这两个酶是同尾酶,两端加了3-4个保护碱基),按常规酶切,连接,转化JM109后,两次都未长菌,一颗都没有?连载体自连都没有嘛?
     请问同尾酶连接需要注意什么?容易成功不?请大家多提建议哈,谢谢!
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


04swlcm(金币+1):谢谢参与
可能是转化出了问题。
2楼2010-10-22 10:53:15
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04swlcm

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-10-22 10:53:15:
可能是转化出了问题。

谢谢,你是说感受态不好,还是操作?实验室公用的感受态,我也没检查过感受性,今天测试下。
请问同尾酶连接时需要注意哪些啊?
3楼2010-10-22 11:06:24
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


04swlcm(金币+1):谢谢参与
连接效率低
4楼2010-10-22 11:38:32
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)


04swlcm(金币+1):谢谢参与
04swlcm(金币+1): 2011-01-14 20:59:55
同尾酶应该有很好的连接效果,不过片段不要加的太多了以免片段自连,还有载体自连也应该是很多,我估计是你酶切上出了问题,没有切好。
5楼2010-10-22 17:20:15
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


04swlcm(金币+1):谢谢参与
同尾酶连接不需要额外的注意
6楼2010-10-22 20:00:59
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若雪敏敏

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同尾酶切载体,酶切后想筛选载体自连的质粒,怎么处理机率更高尼?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2014-03-02 21:56:31
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