| 查看: 4514 | 回复: 7 | |||
[求助]
载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。已有3人参与
|
|
新学载体构建，很多东西不明白请多指教。 打算用PET28a 做载体用，怎么插进去读码框不移位？我这么做，用NTI 软件，打开线性化，找到开放阅读框，从 Ncol开始有ATG，那么如果我选择BamHI 作为酶切位点，在设计时要补两个碱基才能保证读码框不移位？GGATCCYYATG---------是这样吗？ 可是等我将目的基因黏贴替换之后就像上图，不知道怎么就移了移位，（将EcoI ---BamHI选中，replace，黏贴后翻转一下）操作错在哪里了呢？图1、图3 对比。 还想问问，Ncol 位点开始的ATG 后边没有终止子，是不是这一段也加到我的目的蛋白前面了？ 第三个问题是软件上的小问题，用NTI软件怎么我在格式上的修改（字体大小、颜色、密码子几个一组）都不能保存？而且有时候没退出，稍微动一下别的窗口之前的格式设置都没有了？请高手指点一下吧。  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 读码框移位_软件截图.doc
2014-02-23 12:34:05, 48 K
» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸方面 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有106人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
求助在载体构建过程中，信号肽与GFP的引物设计、启动子切除以及读码框的问题
已经有3人回复- 什么方法确定插入目的片段后表达载体的阅读框有无发生变化？
已经有9人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
xuejunwang
木虫 (小有名气)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 4600.4
- 红花: 1
- 帖子: 175
- 在线: 260.9小时
- 虫号: 1337696
- 注册: 2011-07-04
- 专业: 疫苗学
2楼2014-02-23 14:07:22
xuejunwang
木虫 (小有名气)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 4600.4
- 红花: 1
- 帖子: 175
- 在线: 260.9小时
- 虫号: 1337696
- 注册: 2011-07-04
- 专业: 疫苗学
3楼2014-02-23 14:08:51
4楼2014-02-23 15:16:32
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:51:04
lingbi: 金币+10 2014-02-24 12:28:33
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:51:04
lingbi: 金币+10 2014-02-24 12:28:33
|
... 请参照这张图谱 http://wenku.baidu.com/view/230f8af7ba0d4a7302763ae4.html 翻译是从NcoI的ATG开始，所以到BamHI时刚好是GGA翻译为Gly TCC翻译为Ser，所以诚如上边同学所答，不用加碱基，不是看NTI自己弄成的三个三个方式，而是要从ATG开始数的。 祝实验顺利  |
5楼2014-02-23 16:56:09
xuejunwang
木虫 (小有名气)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 4600.4
- 红花: 1
- 帖子: 175
- 在线: 260.9小时
- 虫号: 1337696
- 注册: 2011-07-04
- 专业: 疫苗学
6楼2014-02-23 18:35:23
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7752.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 188.2小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
7楼2014-02-23 19:23:38
8楼2014-02-24 12:27:26