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载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。 已有3人参与
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新学载体构建，很多东西不明白请多指教。 打算用PET28a 做载体用，怎么插进去读码框不移位？我这么做，用NTI 软件，打开线性化，找到开放阅读框，从 Ncol开始有ATG，那么如果我选择BamHI 作为酶切位点，在设计时要补两个碱基才能保证读码框不移位？GGATCCYYATG---------是这样吗？ 可是等我将目的基因黏贴替换之后就像上图，不知道怎么就移了移位，（将EcoI ---BamHI选中，replace，黏贴后翻转一下）操作错在哪里了呢？图1、图3 对比。 还想问问，Ncol 位点开始的ATG 后边没有终止子，是不是这一段也加到我的目的蛋白前面了？ 第三个问题是软件上的小问题，用NTI软件怎么我在格式上的修改（字体大小、颜色、密码子几个一组）都不能保存？而且有时候没退出，稍微动一下别的窗口之前的格式设置都没有了？请高手指点一下吧。  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
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2014-02-23 12:34:05, 48 K
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4楼2014-02-23 15:16:32
xuejunwang
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2楼2014-02-23 14:07:22
xuejunwang
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3楼2014-02-23 14:08:51
atlanticwi
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:51:04
lingbi: 金币+10 2014-02-24 12:28:33
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lingbi: 金币+10 2014-02-24 12:28:33
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... 请参照这张图谱 http://wenku.baidu.com/view/230f8af7ba0d4a7302763ae4.html 翻译是从NcoI的ATG开始，所以到BamHI时刚好是GGA翻译为Gly TCC翻译为Ser，所以诚如上边同学所答，不用加碱基，不是看NTI自己弄成的三个三个方式，而是要从ATG开始数的。 祝实验顺利  |
5楼2014-02-23 16:56:09
