应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。
81/1返回列表
查看: 4968  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lingbi

银虫 (正式写手)

[求助] 载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。 已有3人参与

新学载体构建，很多东西不明白请多指教。

打算用PET28a 做载体用，怎么插进去读码框不移位？我这么做，用NTI 软件，打开线性化，找到开放阅读框，从 Ncol开始有ATG，那么如果我选择BamHI 作为酶切位点，在设计时要补两个碱基才能保证读码框不移位？GGATCCYYATG---------是这样吗？
可是等我将目的基因黏贴替换之后就像上图，不知道怎么就移了移位，（将EcoI ---BamHI选中，replace，黏贴后翻转一下）操作错在哪里了呢？图1、图3 对比。

还想问问，Ncol 位点开始的ATG 后边没有终止子，是不是这一段也加到我的目的蛋白前面了？

第三个问题是软件上的小问题，用NTI软件怎么我在格式上的修改（字体大小、颜色、密码子几个一组）都不能保存？而且有时候没退出，稍微动一下别的窗口之前的格式设置都没有了？请高手指点一下吧。载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。
1.jpg


载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。-1
2.jpg


载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。-2
3.jpg
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 读码框移位_软件截图.doc
    • 2014-02-23 12:34:05, 48 K

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸方面

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-23 12:36:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuejunwang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:50:53
lingbi: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-02-24 12:28:23
下面那条链是编码链，应该不需要加碱基
赞一下 回复此楼
Neversaygoodbye
2楼2014-02-23 14:07:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuejunwang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lingbi: 金币+2 2014-02-23 15:16:48
NcoI至BamHI之间的这段氨基酸序列融合在你的蛋白N端
赞一下(1人) 回复此楼
Neversaygoodbye
3楼2014-02-23 14:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingbi

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuejunwang at 2014-02-23 14:07:22
下面那条链是编码链，应该不需要加碱基

我知道看下边那条链，但是从Nocl开始数到BamHI刚好缺两位，不补不上我自己的目的蛋白就移位了。BamHI ggatcc,跟上边的接上应该是如下排的吧，麻烦你再给数数，是我哪里数错了？

GG  ATC  CAT  G-----
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-23 15:16:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:51:04
lingbi: 金币+10 2014-02-24 12:28:33
...
    请参照这张图谱
    http://wenku.baidu.com/view/230f8af7ba0d4a7302763ae4.html
    翻译是从NcoI的ATG开始，所以到BamHI时刚好是GGA翻译为Gly TCC翻译为Ser，所以诚如上边同学所答，不用加碱基，不是看NTI自己弄成的三个三个方式，而是要从ATG开始数的。
    祝实验顺利
赞一下(2人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
5楼2014-02-23 16:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuejunwang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lingbi: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-02-24 12:28:43
就是就是，起始密码子是ATG
赞一下 回复此楼
Neversaygoodbye
6楼2014-02-23 18:35:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:51:15
做融合表达要使表达框不移码你保证前后两个蛋白阅读框一致，你翻译从NcoI的ATG开始不用考虑前面的BamHI位点。
赞一下 回复此楼
hehe
7楼2014-02-23 19:23:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingbi

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-23 16:56:09
...
    请参照这张图谱
    http://wenku.baidu.com/view/230f8af7ba0d4a7302763ae4.html
    翻译是从NcoI的ATG开始，所以到BamHI时刚好是GGA翻译为Gly TCC翻译为Ser，所以诚如上边同学所答，不用加碱基，不是 ...

我明白你的意思了，图我看到了确实在BamHI前边还有一个 ATG，我想问题可能是我用NTI软件时找ORF 设定的问题，没能找到它。
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-24 12:27:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lingbi 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 可靠消息，8月21号(明天)放榜 +9 医学老男孩 2026-08-20 10/500 2026-08-20 10:21 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +20 yaoyewhu2008 2026-08-20 20/1000 2026-08-20 09:41 by 2026年国自然基�
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭