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lingbi

银虫 (正式写手)

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[求助] 载体构建出现读码框移位，不知道什么原因，求高手指点。已有3人参与

新学载体构建，很多东西不明白请多指教。

打算用PET28a 做载体用，怎么插进去读码框不移位？我这么做，用NTI 软件，打开线性化，找到开放阅读框，从 Ncol开始有ATG，那么如果我选择BamHI 作为酶切位点，在设计时要补两个碱基才能保证读码框不移位？GGATCCYYATG---------是这样吗？
可是等我将目的基因黏贴替换之后就像上图，不知道怎么就移了移位，（将EcoI ---BamHI选中，replace，黏贴后翻转一下）操作错在哪里了呢？图1、图3 对比。

还想问问，Ncol 位点开始的ATG 后边没有终止子，是不是这一段也加到我的目的蛋白前面了？

第三个问题是软件上的小问题，用NTI软件怎么我在格式上的修改（字体大小、颜色、密码子几个一组）都不能保存？而且有时候没退出，稍微动一下别的窗口之前的格式设置都没有了？请高手指点一下吧。

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附件 1 : 读码框移位_软件截图.doc

2014-02-23 12:34:05, 48 K

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1楼 2014-02-23 12:36:12

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lingbi

银虫 (正式写手)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-23 16:56:09
...
请参照这张图谱
http://wenku.baidu.com/view/230f8af7ba0d4a7302763ae4.html
翻译是从NcoI的ATG开始，所以到BamHI时刚好是GGA翻译为Gly TCC翻译为Ser，所以诚如上边同学所答，不用加碱基，不是 ...

我明白你的意思了，图我看到了确实在BamHI前边还有一个 ATG，我想问题可能是我用NTI软件时找ORF 设定的问题，没能找到它。