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lingbi

银虫 (正式写手)

[求助] 载体构建出现读码框移位,不知道什么原因,求高手指点。 已有3人参与

新学载体构建,很多东西不明白请多指教。

打算用PET28a 做载体用,怎么插进去读码框不移位?我这么做,用NTI 软件,打开线性化,找到开放阅读框,从 Ncol开始有ATG,那么如果我选择BamHI 作为酶切位点,在设计时要补两个碱基才能保证读码框不移位?GGATCCYYATG---------是这样吗?
可是等我将目的基因黏贴替换之后就像上图,不知道怎么就移了移位,(将EcoI ---BamHI选中,replace,黏贴后翻转一下)操作错在哪里了呢?图1、图3 对比。

还想问问,Ncol 位点开始的ATG 后边没有终止子,是不是这一段也加到我的目的蛋白前面了?

第三个问题是软件上的小问题,用NTI软件怎么我在格式上的修改(字体大小、颜色、密码子几个一组)都不能保存?而且有时候没退出,稍微动一下别的窗口之前的格式设置都没有了?请高手指点一下吧。载体构建出现读码框移位,不知道什么原因,求高手指点。
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载体构建出现读码框移位,不知道什么原因,求高手指点。-1
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  • 附件 1 : 读码框移位_软件截图.doc
  • 2014-02-23 12:34:05, 48 K

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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-23 23:51:15
做融合表达要使表达框不移码你保证前后两个蛋白阅读框一致,你翻译从NcoI的ATG开始不用考虑前面的BamHI位点。
hehe
7楼2014-02-23 19:23:38
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xuejunwang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-02-23 23:50:53
lingbi: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-02-24 12:28:23
下面那条链是编码链,应该不需要加碱基
Neversaygoodbye
2楼2014-02-23 14:07:22
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xuejunwang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lingbi: 金币+2 2014-02-23 15:16:48
NcoI至BamHI之间的这段氨基酸序列融合在你的蛋白N端
Neversaygoodbye
3楼2014-02-23 14:08:51
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lingbi

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xuejunwang at 2014-02-23 14:07:22
下面那条链是编码链,应该不需要加碱基

我知道看下边那条链,但是从Nocl开始数到BamHI刚好缺两位,不补不上我自己的目的蛋白就移位了。BamHI ggatcc,跟上边的接上应该是如下排的吧,麻烦你再给数数,是我哪里数错了?

GG  ATC  CAT  G-----
4楼2014-02-23 15:16:32
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