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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做了3周的载体构建了就是构建不上，求助啊
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

[求助] 我做了3周的载体构建了就是构建不上，求助啊

我做了3周的载体构建了就是构建不上，转化后会有菌落也能摇起来，提完质粒用双酶切鉴定跑胶后什么条带都没有了，现在郁闷至极，不知道哪里出问题了，各位大侠求助啊！！！
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1楼 2013-06-23 11:25:43
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
信息太少，构建过程都没有，谁知道什么问题。
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2楼2013-06-23 12:16:15
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oranzxc

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 运气很重要啊 2013-06-24 14:06:34
我师兄说载体构建首先要保证原始材料是正确的（亲自鉴定），每一步操作以后都要验证是否达到了设计的效果，最后再加上一点运气吧
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3楼2013-06-23 13:03:53
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2013-06-24 14:06:17
1949stone: 金币+1, 赞一个 2013-06-24 14:06:43
http://wenku.baidu.com/view/1b0ea0d608a1284ac85043ef.html

希望有帮助
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4楼2013-06-23 14:49:17
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我晴天一片(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 21:42:53
转化后能摇起来，说明至少是空载体。如果你的抗生素没有失效的话。
最好把你的连接体系列出来，以供分析。
把你酶切后的载体用CIAP处理一下，这样就没有那么多自我连接的了。
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5楼2013-06-23 15:59:05
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒提取后跑电泳能看到条带吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-06-23 19:33:42
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我晴天一片(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 21:43:03
提完质粒，跑胶看质量，测浓度后按量再酶切，胶回收后测浓度，按量连接，，每一步最好都定量
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7楼2013-06-23 19:39:16
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-23 19:33:42
质粒提取后跑电泳能看到条带吗？

有条带，但是是好几条，一般做到这里我就觉得不对了，可是我提出来的到底是什么呢？？就是不知道什么原因
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8楼2013-06-23 21:33:36
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-06-23 15:59:05
转化后能摇起来，说明至少是空载体。如果你的抗生素没有失效的话。
最好把你的连接体系列出来，以供分析。
把你酶切后的载体用CIAP处理一下，这样就没有那么多自我连接的了。

酶切体系10微，基因载体是按浓度的3:1连的，然后1微的T4连接酶，1微的buffer。20微体系也连了，倍数扩大了2倍。这个酶切后的CIAP处理要怎么处理呢？、
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9楼2013-06-23 21:36:37
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-06-23 12:16:15
信息太少，构建过程都没有，谁知道什么问题。

构建构成是通常我们的过程，实验室都是这么做的，但我就是做不出来
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10楼2013-06-23 21:37:44
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