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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做了3周的载体构建了就是构建不上，求助啊
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

[求助] 我做了3周的载体构建了就是构建不上，求助啊

我做了3周的载体构建了就是构建不上，转化后会有菌落也能摇起来，提完质粒用双酶切鉴定跑胶后什么条带都没有了，现在郁闷至极，不知道哪里出问题了，各位大侠求助啊！！！
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1楼 2013-06-23 11:25:43
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我晴天一片(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 21:42:53
转化后能摇起来，说明至少是空载体。如果你的抗生素没有失效的话。
最好把你的连接体系列出来，以供分析。
把你酶切后的载体用CIAP处理一下，这样就没有那么多自我连接的了。
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5楼2013-06-23 15:59:05
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-23 21:36:37
酶切体系10微，基因载体是按浓度的3:1连的，然后1微的T4连接酶，1微的buffer。20微体系也连了，倍数扩大了2倍。这个酶切后的CIAP处理要怎么处理呢？、...

载体酶切之后回收，然后用CIAP处理一下，具体可以参考TAKARA的产品说明书。
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13楼2013-06-24 07:54:14
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