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dingyi8909

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
信息有点少,看不出来是哪出问题,应该细节问题
11楼2013-06-23 22:08:22
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-23 21:33:36
有条带,但是是好几条,一般做到这里我就觉得不对了,可是我提出来的到底是什么呢??就是不知道什么原因...

条带的大小对吗?确定是你要的克隆载体?你提取的方法是什么?试剂盒?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
12楼2013-06-24 07:17:49
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-23 21:36:37
酶切体系10微,基因载体是按浓度的3:1连的,然后1微的T4连接酶,1微的buffer。20微体系也连了,倍数扩大了2倍。这个酶切后的CIAP处理要怎么处理呢?、...

载体酶切之后回收,然后用CIAP处理一下,具体可以参考TAKARA的产品说明书。
13楼2013-06-24 07:54:14
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-24 07:17:49
条带的大小对吗?确定是你要的克隆载体?你提取的方法是什么?试剂盒?
...

最多的时候是出现2条,一条是目的条带,另外一条在marker以上。有时候也会有三条,也是这种情况。一双酶切就什么都没有了,这到底是怎么回事呢??提质粒是试剂盒提的。
14楼2013-06-24 13:45:57
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

会不会酶切体系有污染?按说dna不会降解的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
15楼2013-06-24 18:23:44
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-24 18:23:44
会不会酶切体系有污染?按说dna不会降解的。

是啊,即使连不上切不开也应该有条带才对啊,怎么就什么都没有呢。如果污染了,不会是每次都污染吧。那要怎么解决污染这个问题??
16楼2013-06-24 21:13:59
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-24 18:23:44
会不会酶切体系有污染?按说dna不会降解的。

DAN降解??还是污染了?我应该怎么做呢??
17楼2013-06-24 21:22:17
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-24 21:22:17
DAN降解??还是污染了?我应该怎么做呢??...

排除法,换个质粒酶切试试,看是否酶切体系有污染;逐一更换反应体系的试剂和酶。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
18楼2013-06-24 22:41:50
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-24 22:41:50
排除法,换个质粒酶切试试,看是否酶切体系有污染;逐一更换反应体系的试剂和酶。
...

空载酶切就有质粒,一切重组的就没条带,这到底是怎么回事啊?
19楼2013-06-25 19:25:38
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-25 19:25:38
空载酶切就有质粒,一切重组的就没条带,这到底是怎么回事啊?...

你再想想,得到的空载体和重组载体还有什么差别,最好二者同时再做一次。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
20楼2013-06-25 21:11:03
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