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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做了3周的载体构建了就是构建不上，求助啊
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dingyi8909

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
信息有点少，看不出来是哪出问题，应该细节问题
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11楼2013-06-23 22:08:22
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-23 21:33:36
有条带，但是是好几条，一般做到这里我就觉得不对了，可是我提出来的到底是什么呢？？就是不知道什么原因...

条带的大小对吗？确定是你要的克隆载体？你提取的方法是什么？试剂盒？

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12楼2013-06-24 07:17:49
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-23 21:36:37
酶切体系10微，基因载体是按浓度的3:1连的，然后1微的T4连接酶，1微的buffer。20微体系也连了，倍数扩大了2倍。这个酶切后的CIAP处理要怎么处理呢？、...

载体酶切之后回收，然后用CIAP处理一下，具体可以参考TAKARA的产品说明书。
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13楼2013-06-24 07:54:14
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-24 07:17:49
条带的大小对吗？确定是你要的克隆载体？你提取的方法是什么？试剂盒？
...

最多的时候是出现2条，一条是目的条带，另外一条在marker以上。有时候也会有三条，也是这种情况。一双酶切就什么都没有了，这到底是怎么回事呢？？提质粒是试剂盒提的。
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14楼2013-06-24 13:45:57
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

会不会酶切体系有污染？按说dna不会降解的。

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15楼2013-06-24 18:23:44
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-24 18:23:44
会不会酶切体系有污染？按说dna不会降解的。

是啊，即使连不上切不开也应该有条带才对啊，怎么就什么都没有呢。如果污染了，不会是每次都污染吧。那要怎么解决污染这个问题？？
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16楼2013-06-24 21:13:59
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-24 18:23:44
会不会酶切体系有污染？按说dna不会降解的。

DAN降解？？还是污染了？我应该怎么做呢？？
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17楼2013-06-24 21:22:17
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-24 21:22:17
DAN降解？？还是污染了？我应该怎么做呢？？...

排除法，换个质粒酶切试试，看是否酶切体系有污染；逐一更换反应体系的试剂和酶。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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18楼2013-06-24 22:41:50
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
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18楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-24 22:41:50
排除法，换个质粒酶切试试，看是否酶切体系有污染；逐一更换反应体系的试剂和酶。
...

空载酶切就有质粒，一切重组的就没条带，这到底是怎么回事啊？
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19楼2013-06-25 19:25:38
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-25 19:25:38
空载酶切就有质粒，一切重组的就没条带，这到底是怎么回事啊？...

你再想想，得到的空载体和重组载体还有什么差别，最好二者同时再做一次。

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20楼2013-06-25 21:11:03
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