24小时热门版块排行榜    

查看: 2767  |  回复: 22

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
"酶切体系10微,基因载体是按浓度的3:1连的,然后1微的T4连接酶,1微的buffer。"
你是用T4 DNA连接酶连接的,对吧?那么很可能问题出在T4 DNA连接酶上,T4 DNA连接酶极易失活:要用新的T4 DNA连接酶;不能在室温下操作,要在冰上操作;T4 DNA连接酶加入到反应体系后,不要使用漩涡混合器混合,这将引起T4 DNA连接酶失活,用微量移液器吹打的方式混合;不能对于T4 DNA连接酶加热;反应体系小点,这样加入的T4 DNA连接酶的总量也少些,加入到反应体系的甘油也少,必要的话可用低温下透析方法去掉T4 DNA连接酶试剂中的甘油。
21楼2013-06-25 21:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主详细说下你的构建转化过程,不然不好分析原因啊,若是pcr产物且是双切连接到目的载体的话,检查下:1)载体双切的两个酶距离是否过近,导致双切变成单切;2)目的序列是否酶切位点设计引物时是否添加保护碱基,若没加保护碱基,则先做TA连接,转化,挑取转化子,验证,测序,正确后再从TA载体上双切目的片段,再连接至目的载体
22楼2013-06-28 15:36:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-23 21:33:36
有条带,但是是好几条,一般做到这里我就觉得不对了,可是我提出来的到底是什么呢??就是不知道什么原因...

质粒跑电泳几条带,一般质粒跑电泳的话出现2条或3条带
23楼2013-06-28 15:38:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 我晴天一片 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 7/350 2026-03-17 20:20 by 花125533
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 【0856】化学工程(085602)313 分,本科学科评估A类院校化学工程与工艺,诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 8/400 2026-03-17 16:57 by ruiyingmiao
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +4 梨花珞晚风 2026-03-17 4/200 2026-03-17 13:38 by houyaoxu
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
请填处理意见