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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

[求助] 我做了3周的载体构建了就是构建不上,求助啊

我做了3周的载体构建了就是构建不上,转化后会有菌落也能摇起来,提完质粒用双酶切鉴定跑胶后什么条带都没有了,现在郁闷至极,不知道哪里出问题了,各位大侠求助啊!!!
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bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主详细说下你的构建转化过程,不然不好分析原因啊,若是pcr产物且是双切连接到目的载体的话,检查下:1)载体双切的两个酶距离是否过近,导致双切变成单切;2)目的序列是否酶切位点设计引物时是否添加保护碱基,若没加保护碱基,则先做TA连接,转化,挑取转化子,验证,测序,正确后再从TA载体上双切目的片段,再连接至目的载体
22楼2013-06-28 15:36:28
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

信息太少,构建过程都没有,谁知道什么问题。
2楼2013-06-23 12:16:15
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oranzxc

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 运气很重要啊 2013-06-24 14:06:34
我师兄说载体构建首先要保证原始材料是正确的(亲自鉴定),每一步操作以后都要验证是否达到了设计的效果,最后再加上一点运气吧
3楼2013-06-23 13:03:53
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2013-06-24 14:06:17
1949stone: 金币+1, 赞一个 2013-06-24 14:06:43
4楼2013-06-23 14:49:17
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