应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 片段总是连不到T载体上
21/1返回列表
查看: 3423  |  回复: 22
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 片段总是连不到T载体上

我的片段一个是2000，一个是3000bp，高保真酶扩增出来的，胶回收以后加A，然后和pMD19-T 15度过夜连接，转化到DH5a，感受态是自己做的，蓝白斑都有，挑白斑做单双酶切，全都显示没连上，又做了M13引物扩增，条带在200左右，也表示没连上。来回做了3次，买了新的载体，干脆一个板子上只长1个菌落了。每次转化都有对照，一个是空载体，一般都有一些白斑。一个是control insert，会长一个板子的白斑。一个是只有感受态细胞，什么都不长。实在找不到原因了，请各位帮忙分析。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-06-07 15:28:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原地旋转中晓

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-06-07 17:49:44
这个测序就知道了吧，但是比较麻烦，应该还有其他方法，这个我不是很清楚，你可以再搜索下相关资料。。。
不过我觉得，你将自己的产物稀释100倍左右（根据自己原PCR产物的量计算大概稀释倍数），再用原来的引物及 ...

请问一下如果P出来的条带已经做了胶回收了，用普通Taq酶就加A尾的体系是怎样的呢
赞一下 回复此楼
22楼2017-10-26 19:46:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏天的普洱茶 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭