2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-19 08:32:58
"用T载体上面切下来的片段进行连接后，会出现较多连接到T上面的假阳性"
不明白这是什么意思。你把片段从T载体切下来后不回收片段的吗？为什么还会有连到T载体上的假阳性？
PCR产物做酶切连接没有的话可 ...

3楼: Originally posted by Yocan2012 at 2013-01-19 11:10:35
是从T载体上面切下来的，完全分开后做胶回收，而且回收后的条带很单一。
酶切不完全有可能，但是8个平板一个菌落都不长就不至于了吧？
和一个月前连接的是相同大小的不同基因，而且用的酶切位点是一样的。...

5楼: Originally posted by loveerobin at 2013-01-19 13:19:50
可以用第一个基因连接载体的质粒进行酶切，回收后与第二个基因连接。
也可以尝试用T4连接酶代替Solution1进行连接。

6楼: Originally posted by Yocan2012 at 2013-01-19 15:24:26
是的，用的就是连接有第一个基因的载体，所以才说酶切没有问题的，因为可以明确看到是切开的。...

7楼: Originally posted by loveerobin at 2013-01-19 16:22:57
酶切回收产物跑电泳检测了吗？
那就再做一次转化吧...

8楼: Originally posted by Yocan2012 at 2013-01-19 22:56:43
载体和片段回收后的电泳条带都很亮很单一。
已经做了无数次了，发现每个环节似乎都没有问题，但就是不出结果。...

9楼: Originally posted by loveerobin at 2013-01-20 12:17:05
那就是感受态和板子的问题了
借别人的感受态用用
如果一样的话，大概是自己的板子时间太久了或者抗生素需要重新配制了...