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片段与载体的连接问题
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本人自己构建了一个8863bp大小的载体，想要将1900bp大小的目的基因连接到该载体上，使用的内切酶是SmaI/NotI。一开始很容易就连上了，1个月后再进行连接的时候，却在也连不上了。酶切没有问题；连接酶用的是Takara公司的Solution I，应该也没有问题，因为用它连接T载体的效率比较高。 用T载体上面切下来的片段进行连接后，会出现较多连接到T上面的假阳性；如果用PCR产物直接酶切后连接的话，在选择性平板上没有菌落生长。 求高人或者有过同样遭遇的虫友指点。  |
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