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ruudsossu

银虫 (初入文坛)

[交流] 菌落pcr没结果

利用Cre/loxp已经成功连接上两个目的基因，现在连接第三个基因做菌落pcr时总是没结果，大神们给提供件些建议吧，引物肯定没问题，技术也很成熟，连接前两个基因时非常顺利，第三个各种大白板。。。折磨人啊，感谢给位大神了
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1楼 2013-05-24 08:14:43
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aoda123

木虫 (正式写手)
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币-1, 请勿单纯表情回复。。。下不为例，谢谢合作， 2013-05-24 09:45:52
提取质粒
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2楼2013-05-24 08:17:43
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asdry

木虫 (职业作家)
★
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
祝楼主诸事顺利，心想事成！
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5楼2013-05-24 08:50:00
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草样年花

木虫 (正式写手)
★
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
质粒酶切
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7楼2013-05-24 11:05:23
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ruudsossu

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 草样年花 at 2013-05-24 11:05:23
质粒酶切

阳性的数量很少啊，怎么进行质粒酶切呢
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8楼2013-05-24 14:12:46
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)
★
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
祝顺利！！！我是做race没弄出来。。。。
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15楼2013-05-24 15:22:29
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xjtu0025

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
ruudsossu(myprayer代发): 金币+2, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-05-30 10:35:44
退火温度那些个吧...有没有阳性对照试试....我今天第一次菌落PCR,飘飘亮亮的..或者是你有位点突变了..3'不配对没办法扩增的
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17楼2013-05-24 19:08:36
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ruudsossu

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-05-24 19:08:36
退火温度那些个吧...有没有阳性对照试试....我今天第一次菌落PCR,飘飘亮亮的..或者是你有位点突变了..3'不配对没办法扩增的

已经测过序了，没问题，问了很多人也说没问题，就是阳性的太少了，又来筛选的酶活性不是很强
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18楼2013-05-24 23:28:55
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31208018

新虫 (小有名气)
★
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
楼主你好，我也想用cre/loxp系统做一个条件基因敲除的小鼠，但是老板嫌构建loxp载体的时间太长，所以想问一下楼主有没有载体，我们最后自己连目的基因。如果有的话可不可以赠送，或者我们两个单位合作也行。我是内蒙古大学的。
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20楼2013-06-13 21:46:42
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wanjiang093楼
2013-05-24 08:20   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币-1, 请勿单纯表情回复。。。下不为例，谢谢合作， 2013-05-24 09:46:02
ericyo9184楼
2013-05-24 08:47   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币-1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-24 09:46:13
yxg_5686楼
2013-05-24 09:07   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
myprayer: 金币-1, 请勿单纯表情回复。。。下不为例，谢谢合作， 2013-05-24 09:46:23
readytogo9楼
2013-05-24 14:27   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
yaoyao14510楼
2013-05-24 14:37   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
miaojiabing11楼
2013-05-24 14:59   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
天涯201212楼
2013-05-24 15:02   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
youdao113楼
2013-05-24 15:10   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
fakebook14楼
2013-05-24 15:10   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
linguzi16楼
2013-05-24 17:13   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
wocause19楼
2013-05-24 23:36   回复  
ruudsossu(金币+1): 谢谢参与
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