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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跑的胶，条带不是很亮，这是啥原因呢？
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枭翔

金虫 (正式写手)

[交流] 跑的胶，条带不是很亮，这是啥原因呢？ 已有4人参与

跑的胶，条带不是很亮，这是啥原因呢？
小弟，一直找不出原因，请各位师兄师姐帮忙解答。
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1楼 2013-05-22 22:30:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-23 15:34:55
只有样品条带不亮，还是marker也不亮？如果marker也不亮，可能是核酸染料的问题或者成像仪的问题。如果marker亮，说明是样品的问题。
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2楼2013-05-23 05:50:28
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枭翔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-23 05:50:28
只有样品条带不亮，还是marker也不亮？如果marker也不亮，可能是核酸染料的问题或者成像仪的问题。如果marker亮，说明是样品的问题。

都不是很亮，染色剂是刚换的啊，成像系统也调试过。
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3楼2013-05-23 12:14:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-24 03:06:37
gyesang: 回帖置顶 2013-05-24 03:06:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by 枭翔 at 2013-05-23 12:14:25
都不是很亮，染色剂是刚换的啊，成像系统也调试过。...

确定上样量和染料的浓度正确吗？根据我的经验，胶不要做得太厚。如果染料是预先加在胶里的，电泳时间不要特别长，因为核酸染料会向负极跑的。而且，即使肉眼看上去不亮，一般可以通过调节成像的时间获得合适的灰度。
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4楼2013-05-23 12:55:29
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tayifeita

木虫 (小有名气)
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-23 15:35:08
样品和marker降解了，点样时候loading buffer量少了，胶和电泳液浓度有问题，电压不稳，最后胶染色时间不够长。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-05-23 14:32:57
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枭翔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-23 12:55:29
确定上样量和染料的浓度正确吗？根据我的经验，胶不要做得太厚。如果染料是预先加在胶里的，电泳时间不要特别长，因为核酸染料会向负极跑的。而且，即使肉眼看上去不亮，一般可以通过调节成像的时间获得合适的灰度 ...

EB没有直接加在胶里面，胶刚好30mL全用完，
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6楼2013-05-23 14:50:46
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枭翔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tayifeita at 2013-05-23 14:32:57
样品和marker降解了，点样时候loading buffer量少了，胶和电泳液浓度有问题，电压不稳，最后胶染色时间不够长。

我用的是TBE，刚配置的。
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7楼2013-05-23 14:52:08
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:06:52
有时电泳缓冲液使用次数太多缓冲能力下降，电泳过程产热导致片段降解
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8楼2013-05-23 20:55:59
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枭翔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by joan198108 at 2013-05-23 20:55:59
有时电泳缓冲液使用次数太多缓冲能力下降，电泳过程产热导致片段降解

谢谢华哥
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9楼2013-05-23 21:08:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 枭翔 at 2013-05-23 14:50:46
EB没有直接加在胶里面，胶刚好30mL全用完，...

那你把EB加在样品里还是跑完胶后染的？如果是后染，有可能是染色时间不够。
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10楼2013-05-23 23:20:53
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