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求助~5%的胶为何跑出来这样的条带
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luwenyi
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求助~5%的胶为何跑出来这样的条带
用5%的琼脂糖凝胶,120V电压跑的PCR产物,为何有些跑的出来有些跑不出来呢,而且换了模板也是一样的情况
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1楼
2012-07-24 21:42:47
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2012-07-25 14:16:06
5%的胶跑pcr,你的pcr产物是多大呀,很小吗?跑胶首先要保证胶的均一性,最好二次溶胶,在溶胶之后,把胶晃一晃,使之没有气泡冒出后,在放置15分钟后倒胶。你跑的胶都是同一个管里的pcr吗?这个得确定,因为即使相同的体系和条件,你操作上的问题,也可能导致你的产物不一致。还有就是上样的问题。就这么多吧,是我做pcr的经验。看对你有用没。
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coasttocoast。
2楼
2012-07-24 22:28:35
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luwenyi
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2楼
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Originally posted by
tupac225
at 2012-07-24 22:28:35
5%的胶跑pcr,你的pcr产物是多大呀,很小吗?跑胶首先要保证胶的均一性,最好二次溶胶,在溶胶之后,把胶晃一晃,使之没有气泡冒出后,在放置15分钟后倒胶。你跑的胶都是同一个管里的pcr吗?这个得确定,因为即使相同 ...
是两个条带相差很小,胶溶了是没有气泡冒出了,放15分钟的话就全凝了,不是同一个管的PCR,但是同样的产物,在另外两块胶上跑出来的点跟着两快胶上就不一样了,应该不是PCR的问题
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3楼
2012-07-24 22:34:32
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5%,浓度太高了吧,我一般不超过1。5%
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2012-07-25 01:44:13
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luwenyi
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4楼
:
Originally posted by
mitocam
at 2012-07-25 01:44:13
5%,浓度太高了吧,我一般不超过1。5%
因为条带相差太小,所以用浓度低的胶跑不开
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5楼
2012-07-25 08:51:21
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胶的问题,我8%的胶跑出来也挺好的!
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6楼
2012-07-25 08:58:16
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6楼
:
Originally posted by
wu_shiyong
at 2012-07-25 08:58:16
胶的问题,我8%的胶跑出来也挺好的!
你一般溶胶要多久呢?
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7楼
2012-07-25 09:09:45
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wu_shiyong
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luwenyi
at 2012-07-25 09:09:45
你一般溶胶要多久呢?...
我是加入TA液后不晃,加热3分钟左右拿出来晃匀,然后再加热到透明就可以啦!因为浓度比较大,特别稠,所以加热后稍微冷却一下就倒,不然都凝固啦!
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8楼
2012-07-25 10:14:24
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2012-07-25 14:16:17
如果你的PCR产物很小,建议用2-3%的琼脂糖凝胶就可以了,前面有人做过的,3%的凝胶可以分辨出50bp左右大小的条带来!而且建议楼主电泳的电压不要过大,多大的话有可能导致胶片上的电压分布不均匀而导致条带弯曲!
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坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
9楼
2012-07-25 10:26:10
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Originally posted by
wu_shiyong
at 2012-07-25 10:14:24
我是加入TA液后不晃,加热3分钟左右拿出来晃匀,然后再加热到透明就可以啦!因为浓度比较大,特别稠,所以加热后稍微冷却一下就倒,不然都凝固啦!...
我们也是加热到透明,而且凝固了以后也看上去很好,就是跑出来不理想
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10楼
2012-07-25 12:35:30
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