应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助~5%的胶为何跑出来这样的条带
181/2返回列表12下一页
查看: 1701  |  回复: 17
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

luwenyi

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助~5%的胶为何跑出来这样的条带

用5%的琼脂糖凝胶，120V电压跑的PCR产物，为何有些跑的出来有些跑不出来呢，而且换了模板也是一样的情况
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2012-07-24 21:42:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-25 14:16:06
5%的胶跑pcr，你的pcr产物是多大呀，很小吗?跑胶首先要保证胶的均一性，最好二次溶胶，在溶胶之后，把胶晃一晃，使之没有气泡冒出后，在放置15分钟后倒胶。你跑的胶都是同一个管里的pcr吗？这个得确定，因为即使相同的体系和条件，你操作上的问题，也可能导致你的产物不一致。还有就是上样的问题。就这么多吧，是我做pcr的经验。看对你有用没。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
2楼2012-07-24 22:28:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwenyi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-07-24 22:28:35
5%的胶跑pcr，你的pcr产物是多大呀，很小吗?跑胶首先要保证胶的均一性，最好二次溶胶，在溶胶之后，把胶晃一晃，使之没有气泡冒出后，在放置15分钟后倒胶。你跑的胶都是同一个管里的pcr吗？这个得确定，因为即使相同 ...

是两个条带相差很小，胶溶了是没有气泡冒出了，放15分钟的话就全凝了，不是同一个管的PCR，但是同样的产物，在另外两块胶上跑出来的点跟着两快胶上就不一样了，应该不是PCR的问题
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-24 22:34:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
5%，浓度太高了吧，我一般不超过1。5％
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-25 01:44:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwenyi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mitocam at 2012-07-25 01:44:13
5%，浓度太高了吧，我一般不超过1。5％

因为条带相差太小，所以用浓度低的胶跑不开
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-25 08:51:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶的问题，我8%的胶跑出来也挺好的！
赞一下 回复此楼
低调稳重务实内敛---------------残
6楼2012-07-25 08:58:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwenyi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-07-25 08:58:16
胶的问题，我8%的胶跑出来也挺好的！

你一般溶胶要多久呢？
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-25 09:09:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by luwenyi at 2012-07-25 09:09:45
你一般溶胶要多久呢？...

我是加入TA液后不晃，加热3分钟左右拿出来晃匀，然后再加热到透明就可以啦！因为浓度比较大，特别稠，所以加热后稍微冷却一下就倒，不然都凝固啦！
赞一下 回复此楼
低调稳重务实内敛---------------残
8楼2012-07-25 10:14:24
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-25 14:16:17
如果你的PCR产物很小，建议用2-3%的琼脂糖凝胶就可以了，前面有人做过的，3%的凝胶可以分辨出50bp左右大小的条带来！而且建议楼主电泳的电压不要过大，多大的话有可能导致胶片上的电压分布不均匀而导致条带弯曲！
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
9楼2012-07-25 10:26:10
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwenyi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-07-25 10:14:24
我是加入TA液后不晃，加热3分钟左右拿出来晃匀，然后再加热到透明就可以啦！因为浓度比较大，特别稠，所以加热后稍微冷却一下就倒，不然都凝固啦！...

我们也是加热到透明，而且凝固了以后也看上去很好，就是跑出来不理想
赞一下 回复此楼
10楼2012-07-25 12:35:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luwenyi 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭