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ljx2ljx

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[求助] 巢式PCR问题

请高手指教：我做巢式PCR做了一周多了，第一轮一直没有东西，第二轮也没有东西。（用特异性引物可以扩增出来，说明模板没问题）。退火温度和模板梯度都做了，但是还是不行。可能原因有哪些呢？

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1楼 2013-05-16 22:38:49

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ljx2ljx

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8楼: Originally posted by study韩 at 2013-05-17 23:32:25
请问下楼主，为什么这个PCR体系和平时经常用的PCR体系不一样？...

这个反应体系就是TARAKA的Ex Taq啊，只是模板多了一些，因为我的浓度比较低。做的巢式PCR，兼并引物，用来构建克隆文库。

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9楼2013-05-18 08:42:56

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张文萱

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ljx2ljx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-17 17:11:04

从引物互补关系方面下功夫

2楼2013-05-17 16:24:38

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2楼: Originally posted by 张文萱 at 2013-05-17 16:24:38
从引物互补关系方面下功夫

引物是文献中的经典引物，以前别人用此引物可以P出来的。

3楼2013-05-17 16:35:22

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bullfrog325

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【答案】应助回帖

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ljx2ljx(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-17 17:11:16

楼主再多给些信息吧, 目标产物大小? 什么酶? 程序? 循环数? 跑胶有没有发现很多的引物二聚体? ...你描述的越详细大家才越容易分析.

4楼2013-05-17 16:58:36

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