| 查看: 1701 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
巢式PCR问题
|
||
| 请高手指教：我做巢式PCR做了一周多了，第一轮一直没有东西，第二轮也没有东西。（用特异性引物可以扩增出来，说明模板没问题）。退火温度和模板梯度都做了，但是还是不行。可能原因有哪些呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有215人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help
已经有11人回复
- PCR产物不做纯化和胶回收，直接TA克隆可以吗？
已经有13人回复
- 求助 测序得到条带NCBI上没有同源序列
已经有8人回复
- 求助~RACE扩增不出目的条带
已经有11人回复
- 5‘RACE巢式PCR 求指导
已经有5人回复
- 紧急求助5‘RACE（测序结果问题）
已经有10人回复
- 求助，巢式PCR，出了点儿问题，！
已经有13人回复
- 急急急！巢式PCR，第二轮产物跑胶点样孔有亮带，似有东西跑不出
已经有7人回复
- ITS1和ITS4做样品体系中真菌菌株鉴定，为啥PCR产物竟然是2个条带？
已经有11人回复
- 提基因组的时候做第一次PCR效果很好，但是直接以PCR产物做第二次PCR的模版后...
已经有14人回复
- 通过RT-PCR 获得了一段保守序列 接着如何设计RACE引物
已经有21人回复
- 引物设计的问题
已经有13人回复
- 高GC含量基因片段PCR问题
已经有13人回复
- 二次PCR产物弥散
已经有12人回复
- pcr过程中遇到的诡异现象，求高手解释一下
已经有8人回复
- 巢式PCR后不是单一带
已经有11人回复
- 【求助】pcr引物退火温度
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教下巢式PCR与二次PCR的区别
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR相关问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】5'-RACE求助
已经有8人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
3楼2013-05-17 16:35:22
2楼2013-05-17 16:24:38
bullfrog325
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 193 (高中生)
- 金币: 2880.3
- 散金: 200
- 红花: 24
- 帖子: 744
- 在线: 269.5小时
- 虫号: 1864929
- 注册: 2012-06-20
4楼2013-05-17 16:58:36
|
模板: 海水总DNA，20ng/ul （用物种特异性引物，分别能扩增出来约80bp，所以默认为模板是可以的，一个月前提取的DNA） 引物：文献中经典引物，不是本人设计，有人做出来，经过验证时可以的 反应条件：退火温度57,55,50度都尝试过，都没有扩增出来 第一轮引物预期扩增460bp，第二轮预期扩增260bp 预变性94度 4min 94度 1min 57/55/50度 1min 72度 1min 反应做25个循环。 72度 7min 反应试剂盒：TAKARA Ex Tap酶 Ex Taq 酶 0.25ul 10*buffer 5ul dNTP（2.5Mm） 4ul 模板 5ul 引物 1和2 （浓度20uM) 各1ul 灭菌水 总反应体系50ul |
5楼2013-05-17 17:26:37
