24小时热门版块排行榜    

查看: 1286  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)


[交流] 如和鉴定一个扩增出的序列是不是全长序列?

请问各位前辈,我用一个酶的全场cDNA序列设计的引物,产物预计大小是1200bp,我以DNA为模板扩增出的产物大于1200bp是什么原因啊?

    还有就是如何检测这个片段是不是全长?如果不是全长,是否可以以这个片段为模板做RACE扩增全长呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-05-16 16:59:31
汗一个, 对不住啊, 第一个问题看走眼了, 没有注意到"大于"....这样的话你要看看产物和基因组DNA的长度比较怎么样, 在这个基因有注释内含子的情况下, 如你的产物等于或者大于基因组DNA大小, 你就需要查污染(基因组DNA污染); 如果你的PCR产物大小是介于1200bp和基因组DNA大小的, 很有可能扩出来的是一个选择性剪切产物. 另外也检查一下引物的特异性, 防止别扩出来的是其他的东西.
至RACE, 你需要用做翻转录后的cDNA作为模板, 不能用已经扩出的那个大于1200bp的PCR, 因为两头的序列已经被设计的引物限制住了.
5楼2013-05-16 16:06:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

崔永霞

铁虫 (小有名气)


补充一下,我是跨这个酶的cDNA序列的起始密码子和终止密码子设计的引物。
2楼2013-05-15 20:00:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
第一个问题, 可能这个基因没有内含子.
第二个问题, 你需要做5' 和 3' RACE.
3楼2013-05-15 20:18:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-15 20:18:25
第一个问题, 可能这个基因没有内含子.
第二个问题, 你需要做5' 和 3' RACE.

如果没有内含子的话,那应该是扩出的片段大小不应该大于1200bp吧?
    还有就是关于RACE技术,不是应该是以RNA为模板扩增出cDNA第一链,然后以第一链为模板设计引物来做3‘RACE和5'RACE扩增全长吗?可是我是根据这个酶的全长cDNA来设计引物,然后扩增出的这个DNA片段,这样的话也可以用RACEA吗?
4楼2013-05-16 10:44:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 让我中一个面上吧! +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见