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阿娇

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】扩增已知基因的上游序列的方法

已经用PCR的方法扩增出了一个原核生物的某一基因,想知道其上游的调控基因。但是用常规PCR的方法没有成功。请问各位大侠,还有什么方法可以把基因的上游序列弄出来?siebert PCR可以吗?关于siebert PCR的文献很少。不知道还有没有其他的方法。望大家赐教,不胜感激!
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阿娇

金虫 (正式写手)

自己顶一下,别沉了。。。
2楼2010-10-15 10:59:55
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qwk123

禁虫 (正式写手)

阿娇(金币+2):谢谢交流 2010-10-15 20:03:50
本帖内容被屏蔽

3楼2010-10-15 11:10:57
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ben1147

木虫 (正式写手)


lstt09nk(金币+1):感谢参与 2010-10-15 15:31:07
阿娇(金币+3):反向PCR貌似很麻烦,好像实验成功率不高。 2010-10-15 20:04:21
反向吧,一般都能行的啊
4楼2010-10-15 13:59:04
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ymzfeng

金虫 (小有名气)


silicare(金币+1):谢谢参与 2010-10-15 17:41:54
阿娇(金币+5):谢谢交流,我查下着方面的资料,非常感谢! 2010-10-15 20:05:03
RACE-PCR和Tail-PCR
可以考虑下的
还有反向PCR
5楼2010-10-15 14:13:07
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

阿娇(金币+3):谢谢交流 2010-10-15 20:05:15
做个反向pcr 就拿到了
6楼2010-10-15 14:58:17
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阿娇

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by ymzfeng at 2010-10-15 14:13:07:
RACE-PCR和Tail-PCR
可以考虑下的
还有反向PCR

原核生物可以做RACE-PCR么?貌似是真核生物有polyA尾的才可以做吧?
7楼2010-10-15 21:10:27
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怎么都行

银虫 (小有名气)

阿娇(金币+4):设计引物和接头难度确实很大。谢谢交流! 2010-10-16 14:41:37
有个办法麻烦点但一定能扩出来,用你已得到的基因序列设计一条下游引物,上游设置一系列接头,用相应的内切酶酶切基因组DNA,与接头连接。设计接头特异性引物与基因特异性引物组对进行PCR。产物测序。可以多设几种接头,逐个尝试。
8楼2010-10-15 21:32:15
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)

阿娇(金币+2):谢谢交流!方法都比较麻烦啊。呵呵 2010-10-16 14:42:26
TAIL-PCR,非常有效!
Nothingisimpossible!
9楼2010-10-16 07:02:32
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)

但需要多个巢式引物和随机兼并引物,并且需要多次改变条件,较麻烦!
Nothingisimpossible!
10楼2010-10-16 07:03:59
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