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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】扩增已知基因的上游序列的方法
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阿娇

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】扩增已知基因的上游序列的方法

已经用PCR的方法扩增出了一个原核生物的某一基因，想知道其上游的调控基因。但是用常规PCR的方法没有成功。请问各位大侠，还有什么方法可以把基因的上游序列弄出来？siebert PCR可以吗？关于siebert PCR的文献很少。不知道还有没有其他的方法。望大家赐教，不胜感激！
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1楼 2010-10-15 10:36:38
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阿娇

金虫 (正式写手)
自己顶一下，别沉了。。。
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2楼2010-10-15 10:59:55
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qwk123

禁虫 (正式写手)
阿娇(金币+2):谢谢交流 2010-10-15 20:03:50
本帖内容被屏蔽
3楼2010-10-15 11:10:57
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):感谢参与 2010-10-15 15:31:07
阿娇(金币+3):反向PCR貌似很麻烦，好像实验成功率不高。 2010-10-15 20:04:21
反向吧，一般都能行的啊
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4楼2010-10-15 13:59:04
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-10-15 17:41:54
阿娇(金币+5):谢谢交流，我查下着方面的资料，非常感谢！ 2010-10-15 20:05:03
RACE-PCR和Tail-PCR
可以考虑下的
还有反向PCR
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5楼2010-10-15 14:13:07
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
阿娇(金币+3):谢谢交流 2010-10-15 20:05:15
做个反向pcr 就拿到了
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6楼2010-10-15 14:58:17
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阿娇

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ymzfeng at 2010-10-15 14:13:07:
RACE-PCR和Tail-PCR
可以考虑下的
还有反向PCR

原核生物可以做RACE-PCR么？貌似是真核生物有polyA尾的才可以做吧？
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7楼2010-10-15 21:10:27
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怎么都行

银虫 (小有名气)
阿娇(金币+4):设计引物和接头难度确实很大。谢谢交流！ 2010-10-16 14:41:37
有个办法麻烦点但一定能扩出来，用你已得到的基因序列设计一条下游引物，上游设置一系列接头，用相应的内切酶酶切基因组DNA，与接头连接。设计接头特异性引物与基因特异性引物组对进行PCR。产物测序。可以多设几种接头，逐个尝试。
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8楼2010-10-15 21:32:15
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)
阿娇(金币+2):谢谢交流！方法都比较麻烦啊。呵呵 2010-10-16 14:42:26
TAIL-PCR，非常有效！
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Nothingisimpossible!
9楼2010-10-16 07:02:32
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)
但需要多个巢式引物和随机兼并引物，并且需要多次改变条件，较麻烦！
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Nothingisimpossible!
10楼2010-10-16 07:03:59
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