应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如和鉴定一个扩增出的序列是不是全长序列？
51/1返回列表
查看: 1103  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

崔永霞

铁虫 (小有名气)

[交流] 如和鉴定一个扩增出的序列是不是全长序列？

请问各位前辈，我用一个酶的全场cDNA序列设计的引物，产物预计大小是1200bp，我以DNA为模板扩增出的产物大于1200bp是什么原因啊？

    还有就是如何检测这个片段是不是全长？如果不是全长，是否可以以这个片段为模板做RACE扩增全长呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-05-15 19:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)
补充一下，我是跨这个酶的cDNA序列的起始密码子和终止密码子设计的引物。
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-15 20:00:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第一个问题, 可能这个基因没有内含子.
第二个问题, 你需要做5' 和 3' RACE.
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-15 20:18:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-15 20:18:25
第一个问题, 可能这个基因没有内含子.
第二个问题, 你需要做5' 和 3' RACE.

如果没有内含子的话，那应该是扩出的片段大小不应该大于1200bp吧？
    还有就是关于RACE技术，不是应该是以RNA为模板扩增出cDNA第一链，然后以第一链为模板设计引物来做3‘RACE和5'RACE扩增全长吗？可是我是根据这个酶的全长cDNA来设计引物，然后扩增出的这个DNA片段，这样的话也可以用RACEA吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-16 10:44:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
崔永霞(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-16 16:59:31
汗一个, 对不住啊, 第一个问题看走眼了, 没有注意到"大于"....这样的话你要看看产物和基因组DNA的长度比较怎么样, 在这个基因有注释内含子的情况下, 如你的产物等于或者大于基因组DNA大小, 你就需要查污染(基因组DNA污染); 如果你的PCR产物大小是介于1200bp和基因组DNA大小的, 很有可能扩出来的是一个选择性剪切产物. 另外也检查一下引物的特异性, 防止别扩出来的是其他的东西.
至RACE, 你需要用做翻转录后的cDNA作为模板, 不能用已经扩出的那个大于1200bp的PCR, 因为两头的序列已经被设计的引物限制住了.
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-16 16:06:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 崔永霞 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂 +9 觉得好的吧 2026-04-10 9/450 2026-04-10 22:16 by 猪会飞
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考研] 087100初试311求调剂 +3 任雅琴 2026-04-09 3/150 2026-04-09 22:42 by lbsjt
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 一志愿中科院105500专业总分315求调剂 +6 lallalh 2026-04-09 7/350 2026-04-09 17:51 by lallalh
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 0703化学调剂 348分 +14 唉我超真没招了 2026-04-06 15/750 2026-04-08 19:16 by 我减肥1
[考研] 327求调剂 +12 Xxjc1107. 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:46 by luoyongfeng
[考研] 0703调剂，一志愿天津大学319分 +23 haaaabcd 2026-04-05 26/1300 2026-04-08 16:19 by luoyongfeng
[考研] 专硕085403，291分，有两篇专利，一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +12 zyx上岸！ 2026-04-04 12/600 2026-04-07 02:09 by BruceLiu320
[考研] 338求调剂 +4 我想上岸ii 2026-04-05 4/200 2026-04-06 21:04 by 木子君1218
[考研] 专硕304找调剂，一线城市最好 +3 李lsl李 2026-04-05 3/150 2026-04-06 12:16 by ffffjjjj
[考研] 0855求调剂材料 +11 红桃灼灼 2026-04-04 12/600 2026-04-06 10:26 by 蓝云思雨
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +6 ioodiiij 2026-04-04 6/300 2026-04-05 10:09 by guoweigw
[考研] 320求调剂 +3 一样圆 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:29 by 啵啵啵0119
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:08 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭