24小时热门版块排行榜    

查看: 1482  |  回复: 17

liuxiuaza

金虫 (正式写手)

[求助] TA克隆的问题

我的目的条带是785bp,拿目的条带与pTG19-T连接后转化感受态细胞,进行菌液PCR时,条带都500bp以下,用M13通用引物做PCR发现不是没有连接上,只是连接的片段很短,不知道是哪里出了问题?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-05-10 18:49:31
liuxiuaza: 金币+1 2013-05-13 11:07:03
你能确定你的目的条带是785bp??
以什么为模板扩增的?

少了只能说你的目的条带785bp可能是错误的.
2楼2013-05-10 14:18:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuxiuaza(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-10 22:50:39
liuxiuaza: 金币+3, 已经反复做过了,还是不行的 2013-05-13 11:07:24
给你个建议,如果你几次都是这样,从PCR开始把PCR所以东西换成新的,再做一次。
3楼2013-05-10 15:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihaiyan0208

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuxiuaza: 金币+1 2013-05-13 11:09:43
liuxiuaza(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-13 12:50:25
你可能是胶回收的时候,可能紫外照射时间过长,导致片段断裂,你试下看胶回收时注意下紫外照射时间尽量短些。还有你用M13检测的话应该是只能检测是否连接上片段吧,你能确定连接上的就是你的目的片段,而不是杂带。你挑了多少也菌斑检测啊,你可以试着多挑一些试试,我当时也有这种情况,后来多挑几个就发现正确的目的条带了。
4楼2013-05-10 23:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liuxiuaza: 金币+1 2013-05-13 11:09:49
目的片段回收后是否跑胶验证,确定是785bp?
5楼2013-05-11 07:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-05-10 14:18:29
你能确定你的目的条带是785bp??
以什么为模板扩增的?

少了只能说你的目的条带785bp可能是错误的.

利用基因组DNA扩增的目的片段,后来又利用PCR产物进行了PCR,确定是700-800bp的片段
6楼2013-05-13 11:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lihaiyan0208 at 2013-05-10 23:08:13
你可能是胶回收的时候,可能紫外照射时间过长,导致片段断裂,你试下看胶回收时注意下紫外照射时间尽量短些。还有你用M13检测的话应该是只能检测是否连接上片段吧,你能确定连接上的就是你的目的片段,而不是杂带。 ...

我总过挑了130个菌落了,要么没有条带,要么就是条带大小不正确,郁闷呐
7楼2013-05-13 11:08:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-11 07:04:21
目的片段回收后是否跑胶验证,确定是785bp?

是的,确定是700-800bp的片段
8楼2013-05-13 11:09:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rth1983

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liuxiuaza(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-13 12:50:39
有可能是连接前DNA片段断裂,也有可能是你的DNA片段和你的载体中间有些问题,可以换一种载体试试
9楼2013-05-13 11:35:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuqingchun33

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


liuxiuaza: 金币+1 2013-05-14 15:19:39
测序或者提完质粒后PCR
在这个纷绕的世俗世界里,能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切,也是一种境界。
10楼2013-05-13 13:33:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuxiuaza 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 能否申诉? +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见