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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

[求助] TA克隆的问题

我的目的条带是785bp,拿目的条带与pTG19-T连接后转化感受态细胞,进行菌液PCR时,条带都500bp以下,用M13通用引物做PCR发现不是没有连接上,只是连接的片段很短,不知道是哪里出了问题?
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liuxiuaza: 金币+1 2013-05-13 11:09:49
目的片段回收后是否跑胶验证,确定是785bp?
5楼2013-05-11 07:04:21
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-05-10 18:49:31
liuxiuaza: 金币+1 2013-05-13 11:07:03
你能确定你的目的条带是785bp??
以什么为模板扩增的?

少了只能说你的目的条带785bp可能是错误的.
2楼2013-05-10 14:18:29
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuxiuaza(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-10 22:50:39
liuxiuaza: 金币+3, 已经反复做过了,还是不行的 2013-05-13 11:07:24
给你个建议,如果你几次都是这样,从PCR开始把PCR所以东西换成新的,再做一次。
3楼2013-05-10 15:09:06
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lihaiyan0208

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuxiuaza: 金币+1 2013-05-13 11:09:43
liuxiuaza(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-13 12:50:25
你可能是胶回收的时候,可能紫外照射时间过长,导致片段断裂,你试下看胶回收时注意下紫外照射时间尽量短些。还有你用M13检测的话应该是只能检测是否连接上片段吧,你能确定连接上的就是你的目的片段,而不是杂带。你挑了多少也菌斑检测啊,你可以试着多挑一些试试,我当时也有这种情况,后来多挑几个就发现正确的目的条带了。
4楼2013-05-10 23:08:13
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