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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by liuxiuaza at 2013-05-13 11:09:04
是的,确定是700-800bp的片段...

那只能说是没有连进去。确定T载体还好用吗?T载体放时间长了会发生自连,转一下空T载体试试。
11楼2013-05-14 07:35:42
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by xuqingchun33 at 2013-05-13 13:33:47
测序或者提完质粒后PCR

提了质粒测序了,结果是插入片段是目的片段的一部分。
12楼2013-05-14 15:20:14
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by rth1983 at 2013-05-13 11:35:26
有可能是连接前DNA片段断裂,也有可能是你的DNA片段和你的载体中间有些问题,可以换一种载体试试

连接前断裂的话,也不知道是哪一步断了,做了三次都是一样的结果。这次实验是和其他目的片段一块做的,用同样的载体,结果都很好,测序结果也正确,只有这个片段长一点的做不出来。
13楼2013-05-14 15:21:57
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-14 07:35:42
那只能说是没有连进去。确定T载体还好用吗?T载体放时间长了会发生自连,转一下空T载体试试。...

确定载体是好用的,因为同时做的其他样品是没有问题的。我拿菌液做了中抽,质粒拿出去测序,结果是插入片段是目的片段的一部分。不知道是什么原因啊?你有没有遇到过这种现象啊?
14楼2013-05-14 15:24:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
14楼: Originally posted by liuxiuaza at 2013-05-14 15:24:04
确定载体是好用的,因为同时做的其他样品是没有问题的。我拿菌液做了中抽,质粒拿出去测序,结果是插入片段是目的片段的一部分。不知道是什么原因啊?你有没有遇到过这种现象啊?...

没有遇到过这种情况。可能是目的片段回收过程中断裂。你试试再做一次。
15楼2013-05-15 07:27:44
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lihaiyan0208

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by liuxiuaza at 2013-05-13 11:06:58
利用基因组DNA扩增的目的片段,后来又利用PCR产物进行了PCR,确定是700-800bp的片段...

我觉得你还是重新连接一下吧,有可能你的目的片段根本没连接上去,注意下连接时间不要过长或过短,这都会影响你的连接的,还有你PCR检测的时候也可以用你自己的引物检测下,这样确保连接检测出来的肯定是你的目的片段
16楼2013-05-16 15:38:37
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饿的神啊

新虫 (著名写手)

我也遇到了这样的问题,1000bp左右的条带,用的通用引物检测,载体199bp,可是检测发现大部分条带都只有300bp和500bp,很是郁闷。
LZ的问题有没有解决啊?
17楼2013-06-07 15:21:00
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2013-06-07 15:21:00
我也遇到了这样的问题,1000bp左右的条带,用的通用引物检测,载体199bp,可是检测发现大部分条带都只有300bp和500bp,很是郁闷。
LZ的问题有没有解决啊?

没有解决,我后来又拿去测序了一下,插入片段是目的条带的一部分,然后又对引物进行BLAST,说是引物特异性不好,有多个结合位点,但是PCR时条带大小正确,这个又没办法解释了。我现在也是稀里糊涂的
18楼2013-06-07 17:04:13
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