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7baby1990

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[求助] pcr扩增后的电泳图为什么是这个样子？该如何改进

目的片段大概在1500左右

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1楼 2013-05-04 20:04:11

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凌波丽

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【答案】应助回帖

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7baby1990: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-05-05 12:33:19
myprayer: 金币+1, 真的很感激你。。。。。 2013-05-05 20:58:35

你的PCR结果电泳拖尾，可能是非特异性扩增多，即出现非特异性扩增带。也就是：PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：首先可以提高镁离子的浓度，由1.0mmol/L起以0.05mmol/L为单位逐渐上升，最高不超过10.0mmol/L。提高镁离子的浓度无效的话，调整引物浓度（你的PCR结果电泳拖尾，可能是非特异性扩增多，因此应适当降低引物浓度），适当增加模板量，减少循环次数。减低酶量或调换另一来源的酶。适当提高退火温度。以上都不行则要重新设计引物。每种调整均可以分梯度进行。