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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr扩增后的电泳图为什么是这个样子？该如何改进
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7baby1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-05-05 12:23:36
你的PCR结果电泳拖尾，可能是非特异性扩增多，即出现非特异性扩增带。也就是：PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引 ...

我回去试试提高退火温度看看，也可能我引物加多了，我用的是通用引物1492r，27f，10pmol/ul,我加了2ul
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11楼2013-05-05 12:35:36
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ljj0609

金虫 (小有名气)
个人觉得，p的挺好的啊，基因组浓度大了就会这样吧。菜鸟一枚，个人见解。
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12楼2013-05-05 22:14:32
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jingyko

铜虫 (初入文坛)
1引物特异性不强 ，提高tm温度。
2模板是什么样的？跑个胶作为对照。有可能模板就是拖尾的
3.胶有没有做好
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13楼2013-05-05 22:55:03
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-06 12:19:56
其实没有必要就考虑镁离子的问题，只要用的是公司提供的buffer就没事儿。现在就是降低模板量（比如在25ul体系中加入50-100ng的模板就可以了），还有就是降低循环数，25-30个，不要太多了。如果这样改正后，保证有好结果。
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14楼2013-05-06 08:13:21
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7baby1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-05-06 08:13:21
其实没有必要就考虑镁离子的问题，只要用的是公司提供的buffer就没事儿。现在就是降低模板量（比如在25ul体系中加入50-100ng的模板就可以了），还有就是降低循环数，25-30个，不要太多了。如果这样改正后，保证有好 ...

确实好像模板量加多了，回去按你的建议再试一下
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15楼2013-05-06 17:52:08
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 7baby1990 at 2013-05-06 17:52:08
确实好像模板量加多了，回去按你的建议再试一下...

结果出来了吗
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16楼2013-05-07 15:42:23
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7baby1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-05-07 15:42:23
结果出来了吗...

今天没有做，明天上午做
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17楼2013-05-07 18:57:35
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