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7baby1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-05-05 12:23:36
你的PCR结果电泳拖尾,可能是非特异性扩增多,即出现非特异性扩增带。也就是:PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引 ...

我回去试试提高退火温度看看,也可能我引物加多了,我用的是通用引物1492r,27f,10pmol/ul,我加了2ul
11楼2013-05-05 12:35:36
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ljj0609

金虫 (小有名气)

个人觉得,p的挺好的啊,基因组浓度大了就会这样吧。菜鸟一枚,个人见解。
12楼2013-05-05 22:14:32
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jingyko

铜虫 (初入文坛)

1引物特异性不强 ,提高tm温度。
2模板是什么样的?跑个胶作为对照。有可能模板就是拖尾的
3.胶有没有做好
13楼2013-05-05 22:55:03
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-06 12:19:56
其实没有必要就考虑镁离子的问题,只要用的是公司提供的buffer就没事儿。现在就是降低模板量(比如在25ul体系中加入50-100ng的模板就可以了),还有就是降低循环数,25-30个,不要太多了。如果这样改正后,保证有好结果。
14楼2013-05-06 08:13:21
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7baby1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-05-06 08:13:21
其实没有必要就考虑镁离子的问题,只要用的是公司提供的buffer就没事儿。现在就是降低模板量(比如在25ul体系中加入50-100ng的模板就可以了),还有就是降低循环数,25-30个,不要太多了。如果这样改正后,保证有好 ...

确实好像模板量加多了,回去按你的建议再试一下
15楼2013-05-06 17:52:08
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 7baby1990 at 2013-05-06 17:52:08
确实好像模板量加多了,回去按你的建议再试一下...

结果出来了吗
16楼2013-05-07 15:42:23
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7baby1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by dafeizizhu at 2013-05-07 15:42:23
结果出来了吗...

今天没有做,明天上午做
17楼2013-05-07 18:57:35
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