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陈彦利

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 2174654

[交流] 基因克隆失败原因，求助！

我们要克隆一个目的基因，结果PCR后电泳根本就没有条带，为什么呀，请高手帮忙分析原因

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1楼 2013-04-27 14:40:22

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
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虫号: 1614001

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-28 03:03:16

引用回帖:

5楼: Originally posted by 陈彦利 at 2013-04-27 15:13:06
　　以反转录得到的双链cDNA为模板，设计特异性引物，Forward primer：5’-GGCATCCATGTCGCATCTGT-3’；Reverse primer :5’-TCTGACCCTATTGAGCCCTCT-3’。通过PCR扩增获得目的基因OspHT7。
取0.5ml PCR管，一次加 ...

是否检测了cDNA模板的浓度？此外，引物是否好用？PCR时是否做了其它基因为对照？镁离子、引物、dNTP的浓度是多少？