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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母表达 转化子PCR验证
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sunny_andy

金虫 (小有名气)

[求助] 酵母表达 转化子PCR验证

做酵母表达，电转后挑转化子验证，直接菌落PCR, 或是冻融法 先挑了20几个转化子都没有P出来条带  难道假阳性这么高？ 有什么好的方法验证？
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1楼 2013-04-18 13:41:50
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunny_andy(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-02 02:19:28
前几天就是直接PCR验证的，条带比较明显，也没去设计alpha factor和目的基因中间的引物，直接扩目的基因，然后就做验证了
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一花一世界、一叶一菩提
2楼2013-04-18 14:12:23
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sunny_andy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-04-18 14:12:23
前几天就是直接PCR验证的，条带比较明显，也没去设计alpha factor和目的基因中间的引物，直接扩目的基因，然后就做验证了

体系和条件是怎样的呢？
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3楼2013-04-18 14:30:31
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by sunny_andy at 2013-04-18 14:30:31
体系和条件是怎样的呢？...

直接挑取的转化子进行PCR了，体系还是最初的反应体系
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一花一世界、一叶一菩提
4楼2013-05-02 09:45:16
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-10 09:50:32
菌落PCR有阳性对照吗。
菌落最好裂解处理
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5楼2013-05-02 11:13:25
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-10 09:50:38
进行PCR的用的是什么酶呢？？
如果用的是普通的PCR MIX
应该先要裂解，再进行PCR
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6楼2013-05-02 12:26:13
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jdhdragon

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-10 09:50:44
我是菌液离心用ddH2O重悬，取1微升进行扩增，扩增时候先94度10分钟后再进入PCR指数扩增循环，一般效果还不错。你可以参考一下。
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7楼2013-09-09 22:33:03
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84146922

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jdhdragon at 2013-09-09 22:33:03
我是菌液离心用ddH2O重悬，取1微升进行扩增，扩增时候先94度10分钟后再进入PCR指数扩增循环，一般效果还不错。你可以参考一下。

请问用的是酶是普通的酶吗？
PCR mix?
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8楼2013-09-10 08:59:22
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sunny_andy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 84146922 at 2013-09-10 08:59:22
请问用的是酶是普通的酶吗？
PCR mix?...

是的
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9楼2013-09-10 09:18:08
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黄太帝

新虫 (正式写手)
楼主 你当年解决了这个问题吗 我现在也碰到这种问题 求教啊！
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做只快乐的小虫 快乐得学习
10楼2018-04-11 17:12:14
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