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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒双酶切BSA怎么加?

各位同学,我做的是双酶切,用NcoⅠ和XhoⅠ俩个酶,用的BUFFER写的是1×K+BSA,请问一下这个酶切体体系是什么啊?BSA加多少量啊?比如我总体系想切5μL!请同学们帮忙知道下!以前没加BSA的酶切体系如下:质粒3uL,水:1uL,buffer:0.5uL,酶各0.25uL!
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-04-07 17:21:24
小虫子MM: 金币+1, 有帮助 2013-04-11 17:34:57
做双酶切的话 要先确定两种酶的环境是不是一样
一般如果不一样的话
就要看单买来的酶的说明书了
每次买来的酶都会相应的将所需要的缓冲液及其别的所需东西一并在内
自己只需要看所提供的体系自行设计就好
因为一般的酶的含量都是及其少的但是缓冲液及其别的东西很多
一般实验室会遇见总是酶不见了 其他的都东西却很多
所以如果有师姐师兄的话 建议问一下
如果没有就去自己买酶或者咨询一下买的公司 看看买来是都包括什么成分
做出色的科研人
5楼2013-04-07 16:06:17
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shangrila911

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励应助,分子生物版块,期待你的精彩。 2013-04-07 13:47:03
小虫子MM: 金币+1, 有帮助 2013-04-11 17:36:25
K+BSA  是一种反应缓冲液 是成品  不是自己可以分开加的
一切都会好的!
2楼2013-04-07 13:40:30
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shangrila911 at 2013-04-07 13:40:30
K+BSA  是一种反应缓冲液 是成品  不是自己可以分开加的

我们买的酶,比如XhoⅠ,袋里就带有0.1%的BSA啊
3楼2013-04-07 14:52:25
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auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小虫子MM: 金币+2, 有帮助 2013-04-11 17:34:41
如果你是做克隆的话,建议你根本就不要加BSA,因为BSA虽然可降低star activity,但是也影响activity. 一般1-2ug的plasmid, 1ul (10u/ul)enzyme, 1hr-1.5hr足够了
4楼2013-04-07 15:00:03
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