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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解酶切状况
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weebug

版主 (著名写手)

[求助] 求解酶切状况

请问各位大侠，在跑道4,8,10 的拖尾现象做何解呢？这些是基因组DNA在隔夜酶切后跑胶的结果。模板大概1ug, 酶10U, 总容量10ul.

20130116-jw-re600x300.jpg
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天蓝蓝兮日头晒
1楼 2013-01-17 14:54:01
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切，切乱了，多种大小的碎片同时存在。
没有切的基因组没跑一个做对照？也许是基因组降解 也说不定
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2楼2013-01-17 15:34:19
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
量少，酶切时间不够。或许照相曝光的时间再延长些，照片效果都会好些
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shine
3楼2013-01-17 15:43:07
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weebug: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-17 16:40:50
基因组DNA因为比较大，片段里面会有大量的酶切位点，酶切之后会形成长短不一的片段，电泳之后会形成弥散的条带（酶切效果好的情况下）。你的酶切图还有非常明显的主带，说明酶切效果很不好，你的DNA还需要继续纯化之后才能做。
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4楼2013-01-17 16:13:10
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weebug

版主 (著名写手)
谢谢各位，dna提纯的话，我会用苯：氯法，然后酒精洗一洗。 不知各位如何见解。
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天蓝蓝兮日头晒
5楼2013-01-17 16:45:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-18 20:31:52
amisking: 回帖置顶 2013-01-18 20:31:55
切基因组DNA弥散是很正常的，因为切过后分子大小不一。弥散说明你的酶切效果是不错的。1μg总DNA没有切过的话也不是特别亮的，切完后变弥散应该看不到什么了。如果想看的话可以加大DNA用量。
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6楼2013-01-18 08:15:59
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weebug

版主 (著名写手)
不知胶的浓度有没影响，通常我大概1到1.5%。 应不会用PFGE吧？
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天蓝蓝兮日头晒
7楼2013-01-18 16:05:38
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫
感觉是没有酶切完全。
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好好学习，天天向上
8楼2013-01-18 23:23:08
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zg1415

金虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励 2013-01-21 11:39:46
LZ可以适当加大DNA用量，做时间梯度，比如半小时或一小时一次，选择电泳条带最均匀的那个酶切时间，个人感觉你的酶切时间太长~ DNA纯化可以用酚：氯仿：异戊醇抽提几次去掉多余蛋白~，再用乙醇或者异丙醇沉淀后加dd水溶解即可~
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一直被模仿，从未被超越
9楼2013-01-21 09:42:57
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