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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » HIS TAG能否纯化容易被氧化的蛋白？
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我是传奇456

金虫 (正式写手)

[求助] HIS TAG能否纯化容易被氧化的蛋白？

对于一些容易被氧化的蛋白，个人建议最好别用His Tag。这些蛋白在纯化过程中，要加入还原剂防止蛋白被氧化，IMAC是比较忌讳这些还原剂的，当然你可以选用tris-(2- carboxylethyl)-phosphine(TCEP)作为还原剂，因为它不还原金属离子，但成本太高了。这些容易被氧化的蛋白，特别是一些激酶，在加了His Tag 后，会在纯化过程中，显得很不安分，经常会形成沉淀，不容易被浓缩。遇到这些让人头疼的问题该怎么办？要么放弃亲和纯化方法，选用离子层析等其他纯化方法；要么放弃His Tag，选用其他Tag。

看到这么一段话，请教各位，如果我要纯化容易被氧化的蛋白，有什么好方法呢？除了HIS TAG还有什么TAG好用呢？
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1楼2013-01-14 20:45:53
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我是传奇456

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-15 09:03:24
一般是在buffer里加上还原剂或者酶的抑制剂，纯化用his-tag没有问题的。

但是说加还原剂也可还原金属离子？用HIS纯化是不是效率比较低？
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3楼2013-01-15 09:20:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般是在buffer里加上还原剂或者酶的抑制剂，纯化用his-tag没有问题的。
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2楼2013-01-15 09:03:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
我是传奇456: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 明白了，THX~ 2013-01-15 15:01:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by 我是传奇456 at 2013-01-15 09:20:25
但是说加还原剂也可还原金属离子？用HIS纯化是不是效率比较低？...

任何氧化还原反应也要看氧化还原电位的，你是说把Ni2+还原成金属镍吗？我说的还原剂一般是DTT什么的，没有把Ni2+还原成金属啊。
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4楼2013-01-15 09:37:39
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-15 11:54:15
一般没问题，基本要在两天内纯化完毕，而且要在低温，buffer中加DTT或者TCEP-Hcl的情况下纯化。
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5楼2013-01-15 10:26:29
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