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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 16S PCR扩增出现问题
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1989青苹果

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 16S PCR扩增出现问题

我扩的细菌16S的片段，50μl体系，模板量为0.5μl，以前用这些DNA模板能扩出来，现在扩了几次扩不出来了，急！DNA保存在-20℃里的，那位好心大侠解救？
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仰望天空。
1楼 2013-01-08 20:55:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA样品也最好不要反复冻融，大分子模板质量会变差很多。你可以试试多加一点模板P。
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2楼2013-01-09 08:33:05
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1989青苹果

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-09 08:33:05
DNA样品也最好不要反复冻融，大分子模板质量会变差很多。你可以试试多加一点模板P。

谢啦，今天试了加模板量，还是没扩出来。但是我今天想起来原来退火温度是58℃，后来改为55℃了，这几次没扩出来都是用的55℃的退火温度。
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仰望天空。
3楼2013-01-09 23:09:14
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xt123xt

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物冻融用久了 换干的溶了重来
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4楼2013-01-11 12:59:33
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1989青苹果

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xt123xt at 2013-01-11 12:59:33
引物冻融用久了 换干的溶了重来

今晚貌似用mix扩出来啦
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仰望天空。
5楼2013-01-13 23:20:39
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