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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 16s r DNA扩增出来的片段都是1Kb左右，是不是有问题啊？求助
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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] 16s r DNA扩增出来的片段都是1Kb左右，是不是有问题啊？求助

各位大侠，我做16s r DNA，PCR扩增出来的片段都是1kb左右，我看文献都是1.5kb左右的，不知道是什么情况，大家帮我分析下啊。
PCR体系：
总体积                 30 μl
10×Buffer              3 μl
dNTP(0.25 mM)          0.5 μl
Taq DNA polymerase      0.3 μl
27F(25μM)              1 μl
907R(25μM)             1 μl
BSA                    0.2 μl
模板DNA               1 μl
ddH2O                  13 μl
PCR程序：
94℃预变性5min，94℃变性1min，49.5退火45s，72℃延伸90s，35个循环，72℃延伸10min。
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以马内利！
1楼 2011-05-23 22:27:00
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-05-31 11:15:33
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2011-05-23 23:36:16
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hnzhaolongfei

木虫 (著名写手)

将军
退火温度太低
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天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物
3楼2011-05-24 00:15:17
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mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bear0329(金币+1): 谢谢你 2011-05-24 09:25:46
你这对引物扩出来的就应该是1kb左右的啊，没问题的
赞一下 回复此楼
4楼2011-05-24 08:14:30
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bear0329

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wickhamhan at 2011-05-23 23:36:16:
之前有个帖子上有讲：27F/907R这对引物P出来的就是1Kb，如果是27F/1492R的话，是1.5Kb~

谢谢啊
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以马内利！
5楼2011-05-24 09:26:12
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晴天569

银虫 (初入文坛)
循环太多吧？30个就可以啦！
赞一下 回复此楼
6楼2011-05-30 17:16:50
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zgk0205

金虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-31 08:26:07
907-27=880kb，P出来的片段就是这么长的，所以木有问题～
赞一下(1人) 回复此楼
凝练
7楼2011-05-30 19:51:46
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bear0329

金虫 (正式写手)
谢谢啦
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以马内利！
8楼2011-05-31 11:03:04
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