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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] 16s r DNA扩增出来的片段都是1Kb左右,是不是有问题啊?求助

各位大侠,我做16s r DNA,PCR扩增出来的片段都是1kb左右,我看文献都是1.5kb左右的,不知道是什么情况,大家帮我分析下啊。
PCR体系:
总体积                 30 μl
10×Buffer              3 μl
dNTP(0.25 mM)          0.5 μl
Taq DNA polymerase      0.3 μl
27F(25μM)              1 μl
907R(25μM)             1 μl
BSA                    0.2 μl
模板DNA               1 μl
ddH2O                  13 μl
PCR程序:
94℃预变性5min,94℃变性1min,49.5退火45s,72℃延伸90s,35个循环,72℃延伸10min。
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以马内利!
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匿名

用户注销 (小有名气)


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-05-31 11:15:33
本帖仅楼主可见
2楼2011-05-23 23:36:16
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

hnzhaolongfei

木虫 (著名写手)

将军

退火温度太低
天行健,君子以自强不息;地势坤,君子以厚德载物
3楼2011-05-24 00:15:17
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mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bear0329(金币+1): 谢谢你 2011-05-24 09:25:46
你这对引物扩出来的就应该是1kb左右的啊,没问题的
4楼2011-05-24 08:14:30
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bear0329

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wickhamhan at 2011-05-23 23:36:16:
之前有个帖子上有讲:27F/907R这对引物P出来的就是1Kb,如果是27F/1492R的话,是1.5Kb~

谢谢啊
以马内利!
5楼2011-05-24 09:26:12
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晴天569

银虫 (初入文坛)

循环太多吧?30个就可以啦!
6楼2011-05-30 17:16:50
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zgk0205

金虫 (小有名气)

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-31 08:26:07
907-27=880kb,P出来的片段就是这么长的,所以木有问题~
凝练
7楼2011-05-30 19:51:46
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bear0329

金虫 (正式写手)

谢谢啦
以马内利!
8楼2011-05-31 11:03:04
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